| 研究課題/領域番号 |
19659330
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| 研究種目 |
萌芽研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
外科学一般
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
齊藤 雄紀 (齋藤 雄紀) 東海大学, 医学部, 講師 (80349365)
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| 研究分担者 |
亀谷 美恵 東海大学, 医学部, 講師 (50338787)
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| 研究期間 (年度) |
2007 – 2008
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| 研究課題ステータス |
完了 (2008年度)
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| 配分額 *注記 |
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
2008年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2007年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
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| キーワード | ヒト免疫再構築マウス / 乳癌表面抗原 / HER3 (erbB3) / ヒト型抗体 / 乳癌膜表面抗原 / HER3(erbB3) |
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| 研究概要 |
(1)Her-3発現が報告されている乳癌細胞株AU-565およびBT-474を入手し、フローサイトメトリーでHer-3発現を確認したところ、AU-565では発現を認めたが、BT-474ではHer-3発現を認めなかった。
(2)AU-575をin vitro培養の後、MMC処理して10^6ずつ造血幹細胞移植後9週のヒト免疫系再構築が確認されたマウス(CB-NOGマウス)10匹に投与、免疫を行った。マウス2匹は抗体価の測定は不能であった。測定可能なマウス2匹を合わせてKarpas707HとPEG法により細胞融合を行い、これらを96well plate上で培養した。78個のハイブリドーマが観察された。これらに対してAU-575細胞を用いたFACSによるscreeningを行ったが陽性ハイブリドーマの検出は認めなかった。
(3)そこで、Her-3のタンパク質の一時構造から推測されるアミノ酸配列で、抗原性が高いと予想されるN:20-34,N167-183,N479-492を選択し、これらの抗原とKLHをconjugateしてpeptide-KLHを作製した。CB-NOGマウスにこれらのペプチド(100ug/head)を別々に、あるいは3種を同時に同一マウスにFCAを初回免疫,FIAを追加免疫のアジュバントとして2週間ごとに免疫を行い、抗体価をELISAサンドイッチ法にて測定した。その結果、ペプチドに対する抗体価は3種同時に5回免疫したマウスにおいて、数ng/mlレベルまで上昇を認めた。しかしこれは非常に低レベルでありこれらについてハイブリドーマを作製するに至らなかった。
現在も新たなマウスに免疫を施行中である。
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