miRNA標的遺伝子スクリーニング系の開発

• 研究課題/領域番号: 19710171
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 応用ゲノム科学
• 研究機関: 独立行政法人産業技術総合研究所
• 研究代表者: 加藤 義雄 独立行政法人産業技術総合研究所, セルエンジニアリング研究部門, 研究員 (20415657)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• 研究課題ステータス: 完了 (2008年度)
• 配分額: 3,780千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 480千円); 2008年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円); 2007年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
• キーワード: マイクロRNA / 標的遺伝子同定 / 遺伝子発現イメージング / 配列スクリーニング / フローサイトメトリー

研究概要

蛍光タンパク質遺伝子の非翻訳領域に、miRNA と完全に相補的な配列を挿入したウイルスベクターを構築し、miRNA の発現を生きた細胞内で検出する方法を構築した。筋肉特異的に発現するmiR-133 について、幹細胞から筋管細胞へと分化する際に発現上昇するmiR-133 の様子を生きた細胞内でレシオイメージングすることにより定量的に捉えることに成功した。本系はmiRNA の標的配列探索にも展開することが可能である。

研究成果

• [雑誌論文] MicroRNA-140 is expressed in differentiated human articular chondrocytes and modulates IL-1 responses (2009)
  • 著者名/発表者名: Shigeru Miyaki, Tomoyuki Nakasa, Shuhei Otsuki, Shawn P. Grogan, Reiji Higashiyama, Atsushi Inoue, Yoshio Kato, Tempei Sato, Martin K. Lotz, Hiroshi Asahara
  • 雑誌名: Arth. Rheum. (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Real-time functional imaging for monitoring miR-133 during myogenic differentiation (2009)
  • 著者名/発表者名: Yoshio Kato, Shigeru Miyaki, Shigetoshi Yokoyama, Shin Omori, Atsushi Inoue, Machiko Horiuchi and Hiroshi Asahara
  • 雑誌名: Int. J. Biochem. Cell Biol. (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of active microRNA species using fluorescent DNA probe. Miami Winter Symp (2008)
  • 著者名/発表者名: Kittiphong Paiboonskuwong, Yoshio Kato
  • 雑誌名: Short Rep. 19, T22
• [雑誌論文] An efficient fluorescent mehod for selective detection of mature miRNA spiecies (2008)
  • 著者名/発表者名: Yoshio Kato
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 52 ページ: 71-72
• [雑誌論文] Detection of active microRNA species using fluorescent DNA probe (2008)
  • 著者名/発表者名: Kittiphong Paiboonskuwong, Yoshio Kato
  • 雑誌名: Proceedings of the Miami Winter Symposium 19
  • 査読あり
• [雑誌論文] HEKfectin トランスフェクション試薬を用いたHEK 細胞への遺伝子導入 (2007)
  • 著者名/発表者名: 加藤義雄
  • 雑誌名: BioRadiations 8 ページ: 40-41
• [学会発表] 継続的・定量的にmiRNA 発現を観測するための蛍光レポーターベクターの開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 井上敦、味八木茂、加藤義雄
  • 学会等名: 第4 回ケミカルバイオロジー学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2009-05-18
• [学会発表] An efficient fluorescent mehod for selective detection of mature miRNA spiecies (2008)
  • 著者名/発表者名: Yoshio Kato
  • 学会等名: Joint Symposium of 18th International Roundtable on Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids (IRTXVIII) and 35th International Symposium on Nucleic Acids Chemistry (SNAC)
  • 発表場所: Kyoto, Japan
  • 年月日: 2008-09-10
• [学会発表] Detection of active microRNA species using fluorescent DNA probe (2008)
  • 著者名/発表者名: Kittiphong Paiboonskuwong, Yoshio Kato
  • 学会等名: Miami Winter Symposium
  • 発表場所: Florida, USA
  • 年月日: 2008-02-02
• [学会発表] Detection of active microRNA species using fluorescent DNA probe (2008)
  • 著者名/発表者名: Yoshio Kato, Kittiphong Paiboonskuwong
  • 学会等名: Miami Winter Symposium 2008
  • 発表場所: Miami,USA.
  • 年月日: 2008-02-02
• [学会発表] 新規レポーターシステムによるmicroRNA の標的遺伝子同定" (2007)
  • 著者名/発表者名: 井上敦、味八木茂、大森槙、浅原弘嗣、加藤義雄
  • 学会等名: 遺伝情報DECODE 会議
  • 発表場所: 箱根
  • 年月日: 2007-06-24
• [学会発表] 細胞内における低分子RNAの可視化に向けた蛍光DNA プローブの配列設計 (2007)
  • 著者名/発表者名: 加藤義雄
  • 学会等名: 第2 回ケミカルバイオロジー研究会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2007-05-10