変異酵素を用いた糖タンパク質糖鎖の効率的な合成法の開発

• 研究課題/領域番号: 19780252
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 応用分子細胞生物学
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 藤田 清貴 鹿児島大学, 農学部, 助教 (20381189)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• 研究課題ステータス: 完了 (2008年度)
• 配分額: 3,440千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 240千円); 2008年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2007年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
• キーワード: タンパク質 / 糖鎖工学 / エンドグリコシダーゼ / endo-β-N-acetylglucosaminidase / 糖転移 / Endo-A / Endo-M / 糖タンパク質 / 変異酵素 / 糖ペプチド / ケミカルレスキュー / glycosynthase / neoglycoconjugate

研究概要

本研究ではエンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼが持つ糖タンパク質の糖鎖をすげ替える能力を変異導入により高めることを目的とし、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ-M(Endo-M)のN173A変異酵素と酵素反応中間体であるオキサゾリン合成基質を組み合わせることにより、効率的な糖鎖転移方法の開発に成功した。また、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ-A(Endo-A)のN171G変異酵素を用いることで、糖タンパク質への糖鎖転移活性を10倍高めることに成功した。本変異酵素を利用することにより、糖ペプチド及び糖タンパク質への糖鎖の導入効率を高めることができた。

研究成果

• [雑誌論文] Mutants of Mucor hiemalis endo-β-N-acetylglucosaminidase show enhanced transglycosylation and glycosynthase-like activities (2008)
  • 著者名/発表者名: Umekawa, M., Huang, W., Li, B., Fujita, K., Ashida, H., Wang, L. X., and Yamamoto, K.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 283 ページ: 4469-4479
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mutants of Mucor hiemalis endo-β-N-acetylglucosaminidase show enhanced transglycosylation and glycosynthase-like activities. (2008)
  • 著者名/発表者名: Umekawa, M., Huang, W., Li, B., Fujita, K., Ashida, H., Wang, L. X., and Yamamoto, K.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 283 ページ: 4469-4479
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of the catalytic acid-base residue of Arthrobacter endo-β-N-acetylglucosaminidase by chemical rescue of an inactive mutant (2007)
  • 著者名/発表者名: Fujita, K., Sato, R., Toma, K., Kitahara, K., Suganuma, T., Yamamoto, K., and Takegawa, K.
  • 雑誌名: J. Biochem. 142 ページ: 301-306
  • NAID: 10020096397
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of the catalytic acid-base residue of Arthrobacter end o-β-N-acetylglucosaminidase by chemical rescue of an inactive mutant. (2007)
  • 著者名/発表者名: Fujita, K., Sato, R., Toma, K., Kitahara, K., Suganuma, T., Yamamoto, K., and Takegawa, K.
  • 雑誌名: J. Biochem. 142 ページ: 301-306
  • NAID: 10020096397
  • 査読あり
• [学会発表] 部位特異的変異導入によるendo-β-NacetylglucosaminidaseA(Endo-A)の糖転移効率の向上 (2008)
  • 著者名/発表者名: 藤田清貴、北原兼文、菅沼俊彦、山本憲二、竹川薫
  • 学会等名: 第28回日本糖質学会年会
  • 発表場所: つくば
  • 年月日: 2008-08-19
• [学会発表] 部位特異的変異導入によるendo-β-N-acetylglucosaminidase A(Endo-A)の糖転移効率の向上 (2008)
  • 著者名/発表者名: 藤田清貴、北原兼文、菅沼俊彦、山本憲二、竹川薫
  • 学会等名: 第28回日本糖質学会年会
  • 発表場所: つくば
  • 年月日: 2008-08-19