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液中原子間力顕微鏡におけるエネルギー散逸機構の解明と物性・機能計測への展開

研究課題

研究課題/領域番号 19H02598
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
審査区分 小区分29020:薄膜および表面界面物性関連
研究機関京都大学

研究代表者

小林 圭  京都大学, 工学研究科, 准教授 (40335211)

研究期間 (年度) 2019-04-01 – 2022-03-31
研究課題ステータス 完了 (2021年度)
配分額 *注記
17,290千円 (直接経費: 13,300千円、間接経費: 3,990千円)
2021年度: 4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2020年度: 5,460千円 (直接経費: 4,200千円、間接経費: 1,260千円)
2019年度: 7,670千円 (直接経費: 5,900千円、間接経費: 1,770千円)
キーワード原子間力顕微鏡 / 固液界面 / エネルギー散逸
研究開始時の研究の概要

最近、液中で動作する周波数変調原子間力顕微鏡(FM-AFM)を用いて、原子・分子レベルでの表面構造、水和・溶媒和構造、電荷分布が可視化できるようになってきた。一般に、AFM探針と試料との間にはたらく相互作用は保存的相互作用と散逸的相互作用に分けられるが、これまではこれらを分離して計測することが困難であった。本研究課題では、散逸的相互作用を高精度に分離測定し、散逸的相互作用から試料の構造・水和・電荷・機械的特性(機械的安定性や粘弾性)・生体分子間相互作用等に関する情報を得る技術を開発する。

研究成果の概要

液中で動作する周波数変調原子間力顕微鏡(FM-AFM)を用いて、DNAオリガミに固定したタンパク質分子(streptavidin)を対象に3次元フォースマッピング計測を行い、タンパク質分子の分子変形量の推定および電荷密度分布の計測に成功した。一方、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)がその水溶液中でグラファイト基板上に形成する半ミセルと、探針先端に同様に形成されたミセルとの融合・分離の過程を散逸エネルギー計測により明らかにした。さらに、高度好塩菌の紫膜のタンパク質(バクテリオロドプシン)のKCl水溶液中でのフォースマッピング実験により、局所的な水和構造の存在を明らかにした。

研究成果の学術的意義や社会的意義

固液界面は、結晶成長や触媒反応などのさまざまな物理・化学反応の反応場として、また一方、生体分子が機能を発現する活性場として極めて重要な役割を担っている。本研究で明らかにされた固液界面、生体分子表面の原子・分子レベルの構造や水和構造、また散逸エネルギー解析によって明らかとなった粘性との相関に関する知見により、固液界面における物理・化学反応を利用したデバイスの高機能化や、生体分子機能の理解に繋がることが期待される。

報告書

(4件)
  • 2021 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2020 実績報告書
  • 2019 実績報告書
  • 研究成果

    (61件)

すべて 2022 2021 2020 2019 その他

すべて 雑誌論文 (7件) (うち査読あり 7件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (49件) (うち国際学会 13件、 招待講演 2件) 図書 (1件) 備考 (3件) 産業財産権 (1件)

  • [雑誌論文] Nanomechanics of self-assembled surfactants revealed by frequency-modulation atomic force microscopy2022

    • 著者名/発表者名
      Umeda Kenichi、Kobayashi Kei、Yamada Hirofumi
    • 雑誌名

      Nanoscale

      巻: 14 号: 12 ページ: 4626-4634

    • DOI

      10.1039/d2nr00369d

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Structured Water Molecules on Membrane Proteins Resolved by Atomic Force Microscopy2022

    • 著者名/発表者名
      Ido Shinichiro、Kobayashi Kei、Oyabu Noriaki、Hirata Yoshiki、Matsushige Kazumi、Yamada Hirofumi
    • 雑誌名

      Nano Letters

      巻: 22 号: 6 ページ: 2391-2397

    • DOI

      10.1021/acs.nanolett.2c00029

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Surface charge density measurement of a single protein molecule with a controlled orientation by AFM2021

    • 著者名/発表者名
      Yamamoto Yuki、Kominami Hiroaki、Kobayashi Kei、Yamada Hirofumi
    • 雑誌名

      Biophysical Journal

      巻: 120 号: 12 ページ: 2490-2497

    • DOI

      10.1016/j.bpj.2021.04.016

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Atomic-level nature of solid/liquid interface for energy conversion revealed by frequency modulation atomic force microscopy2021

    • 著者名/発表者名
      Minato Taketoshi、Umeda Kenichi、Kobayashi Kei、Araki Yuki、Konishi Hiroaki、Ogumi Zempachi、Abe Takeshi、Onishi Hiroshi、Yamada Hirofumi
    • 雑誌名

      Japanese Journal of Applied Physics

      巻: 60 号: SE ページ: SE0806-SE0806

    • DOI

      10.35848/1347-4065/abffa2

    • NAID

      120007181725

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Molecular-Scale Solvation Structures of Ionic Liquids on a Heterogeneously Charged Surface2020

    • 著者名/発表者名
      Yuki Yamamoto, Hiroaki Kominami, Kei Kobayashi, and Hirofumi Yamada
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry Letters

      巻: 11 号: 19 ページ: 8094-8099

    • DOI

      10.1021/acs.jpclett.0c02356

    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Atomic-Scale Three-Dimensional Local Solvation Structures of Ionic Liquids2020

    • 著者名/発表者名
      Umeda Kenichi、Kobayashi Kei、Minato Taketoshi、Yamada Hirofumi
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry Letters

      巻: 11 号: 4 ページ: 1343-1348

    • DOI

      10.1021/acs.jpclett.9b03874

    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Experimental study on molecular fluctuations of biomolecules by force spectroscopy2020

    • 著者名/発表者名
      Yuki Yamamoto、Hiroaki Kominami、Kei Kobayashi、Hirofumi Yamada
    • 雑誌名

      Japanese Journal of Applied Physics

      巻: 59 号: SI ページ: SIII03-SIII03

    • DOI

      10.35848/1347-4065/ab7b13

    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] フォースマッピングにおける特異結合の破断検出2022

    • 著者名/発表者名
      合原 岳、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第69回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] FM-AFMを用いたフォースマッピング法によるコラーゲンの粘弾性計測2022

    • 著者名/発表者名
      熊谷 隼太郎、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第69回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 走査型熱振動顕微鏡法:表面下ナノ粒子可視化および表面近傍の実効ヤング率測定への応用2022

    • 著者名/発表者名
      船戸 開、木村 邦子、平田 芳樹、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第69回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] FM-AFMを用いたバクテリオロドプシンの細胞内面および外面における表面構造・物性計測2022

    • 著者名/発表者名
      木村 一世、木南 裕陽、小林 圭、平田 芳樹、山田 啓文
    • 学会等名
      第69回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] FM-AFMによるフォースマッピングにおける表面位置特定および物性解析2022

    • 著者名/発表者名
      木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第69回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 自己組織化したコラーゲン分子の液中FM-AFM観察2021

    • 著者名/発表者名
      熊谷 隼太郎、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第82回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] FM-AFMを用いたバクテリオロドプシンの細胞内面および外面における表面構造・物性計測(2)2021

    • 著者名/発表者名
      木村 一世、木南 裕陽、小林 圭、平田 芳樹、山田 啓文
    • 学会等名
      第82回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 脂質二重膜上streptavidinにおけるbiotinとの特異的相互作用の評価2021

    • 著者名/発表者名
      合原 岳、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第82回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 走査型熱振動顕微鏡法によるparylene膜下に埋もれたナノ粒子の可視化2021

    • 著者名/発表者名
      船戸 開、木村 邦子、平田 芳樹、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第82回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 脂質2重膜-マイカ界面の水分子層の直接可視化2021

    • 著者名/発表者名
      木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第82回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 時分割フォースマッピング法の開発および生体機能計測への応用2021

    • 著者名/発表者名
      木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第68回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 時分割フォースマッピング法を用いた生体分子間相互作用評価2021

    • 著者名/発表者名
      堀内 孝介、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第68回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 液中FM-AFMによるDNAオリガミの構造解析2021

    • 著者名/発表者名
      山本 悠樹、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第68回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 液中FM-AFMを用いたバクテリオロドプシンの細胞内面および外面における表面構造・物性計測2021

    • 著者名/発表者名
      木村 一世、木南 裕陽、小林 圭、平田 芳樹、山田 啓文
    • 学会等名
      第68回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 液中FM-AFMによるDNAナノワイヤの3次元固液界面構造計測2021

    • 著者名/発表者名
      熊谷 隼太郎、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第68回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 液中AFMを用いた時分割フォースマッピング法による生体分子のナノ弾性率測定2020

    • 著者名/発表者名
      木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第81回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 液中FM-AFMによるDNAナノワイヤの高分解能観察2020

    • 著者名/発表者名
      熊谷 隼太郎、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第81回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 生化学修飾探針を用いたFM-AFMによる生体分子の高分解能観察2020

    • 著者名/発表者名
      堀内 孝介、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第81回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 液中FM-AFMによるバクテリオロドプシンの表面構造・物性計測2020

    • 著者名/発表者名
      木村 一世、木南 裕陽、小林 圭、平田 芳樹、山田 啓文
    • 学会等名
      第81回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] DNAオリガミへ固定されたタンパク質分子のAFM測定におけるゆらぎの影響2020

    • 著者名/発表者名
      山本 悠樹、木南 裕陽、小林 圭、山田 啓文
    • 学会等名
      第81回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] Nanomechanical characterization of biomolecules with time-division force mapping method by using AFM in aqueous solution2020

    • 著者名/発表者名
      H. Kominami, K. Kobayashi, and H. Yamada
    • 学会等名
      28th International Colloquium on Scanning Probe Microscopy
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] High-resolution imaging of biomolecules by FM-AFM using a biochemically functionalized tip2020

    • 著者名/発表者名
      K. Horiuchi, H. Kominami, K. Kobayashi, and H. Yamada
    • 学会等名
      28th International Colloquium on Scanning Probe Microscopy
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [学会発表] 液中FM-AFMを用いた生体分子のナノスケール弾性率マッピング2020

    • 著者名/発表者名
      木南 裕陽, 小林 圭, 平田 芳樹, 山田 啓文
    • 学会等名
      第67回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] streptavidin 2次元結晶へのbiotin分子特異結合と結晶無秩序化との相関に関する研究2020

    • 著者名/発表者名
      前田 祥吾, 木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      第67回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] PEG-biotin修飾探針か_FM-AFM分解能に与える影響2020

    • 著者名/発表者名
      堀内 孝介, 木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      第67回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] 周波数変調原子間力顕微鏡を用いたフォースマッピングによるバクテリオロドプシンの表面物性計測2020

    • 著者名/発表者名
      深澤 直人, 木南 裕陽, 小林 圭, 平田 芳樹, 山田 啓文
    • 学会等名
      第67回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] 液中FM-AFMによるDNA G-wireイメージング2020

    • 著者名/発表者名
      熊谷 隼太郎, 木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      第67回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] DNAオリガミを用いたタンパク質分子の固定とAFM表面形状測定への影響2020

    • 著者名/発表者名
      山本 悠樹, 木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      第67回応用物理学会春季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] 原子間力顕微鏡計測の最前線 -高分解能液中AFMおよび表面下構造イメージング2020

    • 著者名/発表者名
      山田 啓文, 小林 圭
    • 学会等名
      日本顕微鏡学会第62回シンポジウム
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] 原子間力顕微鏡による生体分子間相互作用力の可視化2020

    • 著者名/発表者名
      木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      日本表面真空学会学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] 瞬時周波数法FM-AFMを用いた固液界面水和構造計測(2)2020

    • 著者名/発表者名
      深澤 直人, 木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      第80回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] フォースカーブ解析によるタンパク質分子のゆらぎ評価の検討(2)2020

    • 著者名/発表者名
      山本 悠樹, 木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      第80回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] 脂質膜表面を足場とする膜孔形成タンパク質分子のFM-AFMを用いたその場観察2020

    • 著者名/発表者名
      平田 芳樹, 木南 裕陽, 小林 圭, 田中 睦生、黒澤 茂、山田 啓文
    • 学会等名
      第80回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] treptavidin 2次元結晶へのbiotin修飾分子結合と結晶無秩序化との相関に関する研究(2)2020

    • 著者名/発表者名
      前田 祥吾, 木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      第80回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] FM-AFMを用いたstreptavidin-biotin間特異的結合破断評価2020

    • 著者名/発表者名
      堀内 孝介, 木南 裕陽, 小林 圭, 山田 啓文
    • 学会等名
      第80回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] FM-AFMによる生体分子の分子スケール力学計測2020

    • 著者名/発表者名
      木南 裕陽, 小林 圭, 平田 芳樹, 山田 啓文
    • 学会等名
      第80回応用物理学会秋季学術講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] Nanometer-Scale Viscoelastic Measurements by Peak-Tracking Scanning Thermal Noise Microscopy2019

    • 著者名/発表者名
      K. Kobayashi
    • 学会等名
      The 4th international symposium on Elucidation of Property of Next Generation Functional Materials and Surface/Interface
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] Investigation of Carrier Dynamics in Organic Polymer Thin-Film Transistors by Time-Resolved Kelvin-Probe Force Microscopy2019

    • 著者名/発表者名
      M. Takeshita, K. Kobayashi and H. Yamada
    • 学会等名
      27th International Colloquium on Scanning Probe Microscopy (ICSPM27)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Local Viscoelastic Measurements of Polymer Thin Films by Peak-Tracking Scanning Thermal Noise Microscopy2019

    • 著者名/発表者名
      K. Kobayashi, K. Kimura and H. Yamada
    • 学会等名
      27th International Colloquium on Scanning Probe Microscopy (ICSPM27)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Local Hydration Structure Measurements by Frequency-Modulation Atomic Force Microscopy with Instantaneous Frequency Method2019

    • 著者名/発表者名
      N. Fukazawa, H. Kominami, K. Kobayashi and H. Yamada
    • 学会等名
      27th International Colloquium on Scanning Probe Microscopy (ICSPM27)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Structural and Functional Visualization of Biomolecules by Frequency-Modulation Atomic Force Microscopy2019

    • 著者名/発表者名
      H. Kominami, K. Kobayashi, Y. Hirata and H. Yamada
    • 学会等名
      32nd International Microprocesses and Nanotechnology Conference (MNC 2019)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] Visualization of Nanoparticles in Polymer Matrix by Scanning Thermal Noise Microscopy2019

    • 著者名/発表者名
      H. Tono, K. Kobayashi, Y. Hirata, K. Kimura, H. Yamada
    • 学会等名
      32nd International Microprocesses and Nanotechnology Conference (MNC 2019)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Experimental Study on Molecular Fluctuations of Biomolecules by Force Spectroscopy2019

    • 著者名/発表者名
      Y. Yamamoto, H. Kominami, K. Kobayashi and H. Yamada
    • 学会等名
      32nd International Microprocesses and Nanotechnology Conference (MNC 2019)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Molecular-scale mechanical property mapping of biomolecules using FM-AFM in liquids2019

    • 著者名/発表者名
      H. Kominami, Y. Hirata, K. Kobayashi, H. Yamada
    • 学会等名
      The 22nd International Conference on Non-Contact Atomic Force Microscopy (NC-AFM2019)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Immobilization of biomolecules using DNA origami for force spectroscopy using FM-AFM2019

    • 著者名/発表者名
      Y. Yamamoto, H. Kominami, K. Kobayashi and H. Yamada
    • 学会等名
      The 22nd International Conference on Non-Contact Atomic Force Microscopy (NC-AFM2019)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Peak-Tracking Atomic Force Microscopy2019

    • 著者名/発表者名
      K. Kobayashi
    • 学会等名
      The 22nd International Conference on Non-Contact Atomic Force Microscopy (NC-AFM2019)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Fast scanning thermal noise microscopy for visualization of buried nanostructures in a polymer matrix2019

    • 著者名/発表者名
      H. Tono, K. Kobayashi and H. Yamada
    • 学会等名
      Molecular Electronics and Bioelectronics (M&BE10)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Investigation of local electric properties of organic polymer thin-film transistors by Kelvin-probe force microscopy2019

    • 著者名/発表者名
      M. Takeshita, K. Kobayashi and H. Yamada
    • 学会等名
      Molecular Electronics and Bioelectronics (M&BE10)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Investigation of relationship between specific binding of biotinylated protains to streptavidin and disruption of streptavidin 2D crystals2019

    • 著者名/発表者名
      S. Maeda, H. Kominami, K. Kobayashi and H. Yamada
    • 学会等名
      Molecular Electronics and Bioelectronics (M&BE10)
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 国際学会
  • [図書] 機器分析ハンドブック 3 固体・表面分析編2021

    • 著者名/発表者名
      辻 幸一、藤原 学、宗林 由樹、南 秀明
    • 総ページ数
      208
    • 出版者
      化学同人
    • ISBN
      9784759820232
    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [備考] 研究室ホームページ

    • URL

      https://piezo.kuee.kyoto-u.ac.jp/

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [備考] 京都大学大学院工学研究科電子工学専攻電子材料物性研究室(山田研究室)

    • URL

      https://piezo.kuee.kyoto-u.ac.jp/

    • 関連する報告書
      2020 実績報告書
  • [備考] 京都大学大学院工学研究科電子工学専攻電子材料物性研究室(山田研究室)

    • URL

      http://piezo.kuee.kyoto-u.ac.jp/

    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [産業財産権] 計測装置、原子間力顕微鏡、および計測方法2019

    • 発明者名
      小林 圭, 木村 邦子, 山田 啓文
    • 権利者名
      国立大学法人京都大学
    • 産業財産権種類
      特許
    • 産業財産権番号
      2019-139696
    • 出願年月日
      2019
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書

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公開日: 2019-04-18   更新日: 2023-01-30  

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