| 研究課題/領域番号 |
19H03232
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分44020:発生生物学関連
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| 研究機関 | 東京工業大学 |
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研究代表者 |
川上 厚志 東京工業大学, 生命理工学院, 准教授 (00221896)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
17,290千円 (直接経費: 13,300千円、間接経費: 3,990千円)
2023年度: 3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
2022年度: 3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
2021年度: 3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
2020年度: 3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
2019年度: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円)
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| キーワード | 組織再生 / 幹細胞 / ゼブラフィッシュ / トランスジェニック / ヒレ |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究では，ゼブラフィッシュモデルにおける基盤研究で，重要かつ未解明の再生プロセスの研究と，それらの間のリンクを解明することによって，再生過程の統合的な理解を大きくステップアップさせることを目標とする。具体的には，
① 再生反応をトリガーする傷シグナル＝恒常性破綻の感知機構，
② 組織を作る間葉細胞の由来，多様性，分化多能性，
③位置情報の正体や形態再生のメカニズム，
を中心に研究を進め，組織再生プロセスの統合的理解へと繋げることを目指す。
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| 研究実績の概要 |
生物は、多細胞体制を長期に維持・再生する能力を持つ。近年，再生過程における様々のシグナルや分子の関与や，再生における細胞の振る舞い，細胞系譜についても解明が進んできたが，依然，再生プロセスの重要なステップに関して解明が進んでいない。本研究はゼブラフィッシュのヒレをモデルとして，①再生応答をトリガーする傷シグナルの性質と実体，②組織の主要な基盤となる間葉細胞の由来，多様性，分化多能性，恒常性維持における役割，③位置情報の正体や形態再生のメカニズム，の3つの点について研究を行い，これら重要かつ未解明のプロセスの間のリンクを解明することによって，再生過程の統合的な理解を飛躍的に進めることを目標とする。本年度の研究では，以下の進捗があった。
①再生応答をトリガーする傷シグナルの性質と実体：これまでに，傷害に応答して転写を活性化する再生応答エンハンサーを同定することに成功した。トランスジェニックアッセイなどによる解析を進め，E-box，AP-1転写因子結合モチーフの組み合わせが再生エンハンサーの実体であることを明らかにした。
②間葉細胞の由来，多様性，分化多能性，恒常性維持：様々の組織で主要な部分を占める間葉細胞は，ヘテロな細胞の集団なのかどうか，再生にどのように寄与するのかなどはわかっていない。Sox9 Cre系統を確立し，体節由来の間葉細胞の細胞系譜の解析を行う系を確立した。これを使った体節細胞の系譜解析により，すでに体節において，間葉系譜と骨芽細胞を生み出す系譜が分かれることが明らかになった。
③位置情報の正体と形態再生のメカニズム： 私達は，以前の研究で，ゼブラフィッシュの鰭条の長い部域と短い部域を司令する位置情報が存在することを示した。さらに詳細な移植実験を重ね，この位置情報は，繰り返し再生しても保持されること，切断位置の間葉細胞によって決まることを示した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究はゼブラフィッシュのヒレをモデルとして， ①再生応答をトリガーする傷シグナルの性質と実体，②組織の主要な基盤となる間葉細胞の由来，多様性，分化多能性，恒常性維持における役割，③位置情報の正体や形態再生のメカニズムについて，研究を進めている。
①再生応答をトリガーする傷シグナルの性質と実体： 組織の恒常性破綻を感知する機構についてはこれまで全くわかっていない。本研究では，傷害に応答した遺伝子の転写活性化メカニズム解析から，トリガーの解明を目指している。傷害に応答して転写を活性化する再生応答エンハンサーを同定することに成功し，トランスジェニックアッセイなどによる解析を進め，E-box，AP-1転写因子結合モチーフの組み合わせが再生エンハンサーの実体であることを明らかにした。
②間葉細胞の由来，多様性，分化多能性： 組織の大部分を占める間葉細胞の実体については余り理解されていない。本研究では，間葉細胞を発生期または成長期に遺伝的に標識して，その細胞子孫の細胞系譜解析を行うことを目指す。本年度は，sox9a Creトランスジェニック（Tg）を用いた細胞系譜の解析を進め，体節においてすでに，将来，間葉にしかならない間葉系譜と，骨芽細胞を生み出す骨芽系間葉系譜が分かれることが明らかになった。
③位置情報の正体や形態再生のメカニズム: ゼブラフィッシュ尾部ヒレの，中央部と，背腹の端の部分の長さの違い（長さの位置情報）は，間葉細胞に内在する位置情報によることを以前に示した。本研究では，位置情報の性質の検討をさらに進め，繰り返し再生しても保持される強固な性質を持つこと，移植した組織の大きさや基部-先端位置に依らず切断位置間葉細胞のもつ位置情報で決まることなどを示した。さらに，ヒレの中央部（短い部分）と両端（長い部分）で差次的に発現する遺伝子の発現解析を行った。研究は概ね順調に進んでいる。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後の研究では，それぞれの項目について以下のように推進する計画である。
①再生応答をトリガーする傷シグナルの性質と実体：これまでの研究において，Fn1b遺伝子上流に複数の再生エンハンサー領域を同定し，トランスジェニックアッセイなどによる解析から，E-box，AP-1転写因子結合モチーフの組み合わせが再生エンハンサーの実体であることを明らかにした。今後は，再生エンハンサーがヒレ以外の心臓などの再生組織や，ゼブラフィッシュ以外の動物種でも同じように傷害に応答するのかを明らかにする。
②間葉細胞の由来，多様性，分化多能性：ヒレなど様々の組織の大部分を占める間葉細胞は，発生期の体節に由来することが私達を含む幾つかの研究によって示された。しかし，間葉細胞のポピュレーションが，いつ，どのように骨芽細胞や軟骨芽細胞へと分化するのかなど，成長過程における分化や組織幹細胞の形成についてはほとんど知見がない。今後の研究では，作製したsox9a Creトランスジェニック系統を用い，体節期からの個々の細胞の系譜を詳細に調べ，成長，維持，再生を通じて，細胞運命が転換しうるかどうかなど解析を行う。
③位置情報の正体や形態再生のメカニズム: ゼブラフィッシュの尾部ヒレは，中央部の長さは，背腹の端の部分よりも短く，これによって早い遊泳が可能となっている。私達はこれまでの鰭条移植実験から，鰭条の長い部域と短い部域を司令する位置情報が存在すること，それは極めて安定に保持される性質を持つことを示した。これまでに，今後は，鰭条の長さの差異がいつどのように生じるか，再生芽の誘導過程，細胞増殖の部域差を詳細に解析し，位置情報の翻訳メカニズムの解明を目指す。
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