研究課題/領域番号 |
19K06482
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分43010:分子生物学関連
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研究機関 | 横浜市立大学 |
研究代表者 |
嶋田 美穂 横浜市立大学, 医学研究科, 客員講師 (50383287)
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研究期間 (年度) |
2019-03-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2020年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2019年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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キーワード | クロマチン構造 / メディエーター / 遺伝子発現 / インスレーター / 組換え体たんぱく質 / カラムクロマトグラフィー / クロマチン構造変換 / CTCF結合 / インシュレーター / TAD形成 / 遺伝子発現制御 / クロマチン / 核内局在 |
研究開始時の研究の概要 |
クロマチンの構造や修飾パターンは遺伝子発現に多大な影響を与える。本研究では、遺伝子発現依存的なクロマチン構造変換の領域特異性を決める機構の解析を目指す。申請者らは以前の研究で細胞分化の系を用い、転写活性化因子と共に働くヒストンシャペロン因子の一つがヘテロクロマチンからユークロマチンへの構造変換に必須であり、転写活性化に必要なことを明らかにした。本研究では血球分化の系と人工的に構築したヘテロクロマチンを用いた試験管内実験系を更に発展させて、クロマチン構造変換の広がりを止めるインシュレーターの機能、更に発展させて遺伝子制御が限定領域で起こる機構を解析する。
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研究実績の概要 |
本年度までに精製した、インスレーターを起点としてクロマチンループの形成に必須と考えられている転写因子であるメディエーターとメディエーターと共に機能する伸長因子群を用いて機能解析を行った。メディエーターはプロモーター上に巨大な複合体を呼び込むことで、クロマチンの3次構造を作成する可能性があるために、メディエーターとの結合に必須な領域に変異を入れた変異体も同時に精製し、この仮説を検証した。まず、この変異がメディエーターとの結合に必須であることを結合実験により検証した。また、in vivoでもこの変異体をもつ細胞では、プロモーター上の巨大な複合体形成の阻害が見られ、遺伝子発現にも影響を及ぼした。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、本研究で得られた一部の研究成果をまとめ、論文を掲載することができたので、概ね研究はうまく行っていると思われる。
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今後の研究の推進方策 |
今後は、現在までに調整した試薬や因子を組み合わせて、インスレーターの転写での機能を解析する。また、1年目で作成したインスレーター領域に変異を加えた細胞株の解析も並行して行う予定である。また、メディエーターの構成因子の1つがクロマチンの3次元構造に影響を及ぼす可能性が示唆できる結果を得ているので、さらに変異体の解析も行う予定である。
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