研究課題/領域番号 |
19K07079
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分47030:薬系衛生および生物化学関連
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研究機関 | 千葉大学 |
研究代表者 |
福本 泰典 千葉大学, 大学院薬学研究院, 講師 (10447310)
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研究分担者 |
中山 祐治 京都薬科大学, 薬学部, 教授 (10280918)
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研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2022年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2021年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2020年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2019年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
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キーワード | DNA損傷応答 / 細胞周期チェックポイント / タンパク質相互作用 / 核小体 / Rad17 / ATR / 細胞周期 / 細胞内局在 / タンパク質分解 / プロテアソーム / APC / Cdh1 / destruction box / 翻訳後修飾 / 9-1-1複合体 / ATPase / 分子標的 |
研究開始時の研究の概要 |
DNA損傷応答の阻害はp53を欠くがん細胞を特異的に死滅させる新たな分子標的として創薬への応用が期待される。ATR依存的DNA損傷応答に関与するRad17はATP加水分解酵素(ATPase)であり、分子標的となるにもかかわらず阻害剤は開発されていない。 本研究はRad17を標的とする分子標的薬のシード化合物の取得を最終的な目標とする。Rad17は普遍的に発現するが、Rad17阻害剤はp53遺伝子変異をもつがん細胞に特異的に効果を発揮すると期待される。化合物ライブラリーからRad17阻害剤の候補化合物を選択する。並行してRad17について基礎的解析を行い、Rad17を標的とする創薬の基盤を作る。
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研究実績の概要 |
[紫外線照射によるRad17タンパク質の核小体移行 昨年度の解析で、Rad17の”central basic domain”に核小体移行シグナルが存在することを見出していた。本年度は、紫外線照射によってその核小体への蓄積が促進されることを見出した。この成果をFukumoto et al. Int. J. Mol. Sci. 2022として報告した。 [Rad17-iVERGEとの相互作用タンパク質の同定と解析] 以前に私達はRad17のiVERGEと命名したC末端領域がRad17の機能に必須であることを報告していた(Fukumoto et a l. BBRC 2017, BBRC 2018, RRRC 2019)。今回私達はiVERGEの相互作用タンパク質Xを同定した。flag-EGFPをCOS-1細胞に発現させ、タンパク質Xが共免疫沈降されることを見出した。相互作用はiVERGE-S667のリン酸化に依存的であった。 相互作用の分子機構を明らかにするためにIn silicoの解析を行った。iVERGEとタンパク質Xについて、ドッキングシュミレーションによって複数の相互作用モデルを作成した。相互作用エネルギーの計算とin vitroでの結果から、実験結果と一致すると期待される相互作用モデルを絞り込んだ。その構造を初期構造として、分子動力学シミュレーション(MD)の焼きなまし法(SA)によって多数の構造を取得した。取得した構造を機械学習によって分類し、大域的最適解と思われる構造を取得した。 作成した構造モデルに基づいてタンパク質Xの変異体を作成し、iVERGEとの相互作用をin vivoにおいて検討した。タンパク質Xの変異体ではiVERGEとの相互作用が減弱した。以上の解析から、iVERGEの相互作用タンパク質Xを同定し、その相互作用機構を明らかにした。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
R3年度の成果をFukumoto et al. Int. J. Mol. Sci. 2022として学術誌に報告した。R4年度の成果は近日中に学術誌に投稿予定である。
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今後の研究の推進方策 |
R4年度の成果を学術誌に投稿し、修正実験などに対応する。 R3年度にRad17のN末に二つのD-boxを同定し論文発表した。R4年度において、その制御機構についての予備的な結果を得た。この成果をさらに発展させ、Rad17依存的DNA損傷応答機構のタンパク質分解系による制御を明らかにする。
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