| 研究開始時の研究の概要 |
肝細胞癌(肝癌)は最も予後不良な癌のひとつである. 応募者らは自然免疫関連分子MICAと肝発癌との関連を同定し、大規模化合物ライブラリのスクリーニングにより複数のMICA発現増強薬およびMICAを失活させるシェダーゼ阻害薬を同定してきた. 今回は対象をMICAシェダーゼに絞り, 公開データベースをもとに肝癌関連MICAシェダーゼの大規模かつ網羅的な探索から開始し, 同定されたシェダーゼにさらに規模の拡大した化合物ライブラリを用いて阻害薬のスクリーニングを行う. ヒットした化合物の抗腫瘍効果を肝癌のin vitroおよびin vivoの系を用いて評価する.
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| 研究実績の概要 |
・レポーターシステム(R&D systems社)による阻害薬スクリーニングを行う.
・新規候補薬のシェダーゼ阻害効果の確認とMICAの評価：肝癌細胞株を, ヒットした化合物(以下「新規候補薬」)で処理しシェダーゼの阻害効果およびMICAの切断回避効果を1, シェダーゼmRNAおよび蛋白, 2. 培養上清中の可溶型MICA蛋白および膜型MICA発現量, でそれぞれ評価をする.新規候補薬の濃度を対数でふった系で濃度依存性の評価を行う.
・In vitro自然免疫モデルによる新規候補薬の抗腫瘍効果の評価： 肝癌細胞株とNK細胞株との共培養の実験系をin vitro自然免疫モデルとして確立した(Goto et al. Sci Rep. 2017). 肝癌細胞株を新規候補薬で処理したのちNK細胞株と共培養し, 上清中のLDHを肝癌細胞株障害の指標として測定する.
・腫瘍移植マウスを用いた新規候補薬の腫瘍縮小効果の評価： 肝癌細胞株を超免疫不全マウスNSGに皮下注射し(1×106個/個体), 正常ドナーマウスからNK細胞を経静脈的に移植(2×106個/個体)する. 1. DMSO(陰性対照), 2. 新規候補薬, 3. 抗NKG2D抗体(1mg/kg, 陽性対照), 4. 新規候補薬および抗NKG2D抗体(シェダーゼ阻害効果のキャンセル実験)を投与し0-24日目まであらかじめ定めた経過日に, 生着した腫瘍径を計測する.
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