研究課題/領域番号 |
19K08474
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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研究機関 | 大阪公立大学 (2022) 大阪市立大学 (2019-2021) |
研究代表者 |
渡邉 俊雄 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 教授 (50336773)
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研究分担者 |
灘谷 祐二 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 講師 (00634007)
大谷 恒史 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 講師 (30597555)
谷川 徹也 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 客員准教授 (70423879)
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研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2019年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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キーワード | NSAIDs / 小腸傷害 / 好中球細胞外トラップ / シトルリン化ヒストン / 好中球 / サイトカイン / 消化管傷害 / NSAID |
研究開始時の研究の概要 |
好中球は様々な刺激に応じて、核酸 DNA 、ヒストン、抗菌性タンパクなどからなる網目状構造物である好中球細胞外トラップ(NETs)を放出する。NETsは感染防御機構である一方、炎症性疾患や自己免疫疾患など様々な疾患に関与している可能性が示唆されている。本研究はNSAIDs起因性小腸傷害におけるNETsの役割について、①NSAIDs起因性小腸傷害におけるNETs形成の有無、②NETsが傷害および炎症に対して促進的または抑制的に働くか、③NETs関連因子と傷害重症度の相関性、④NETs誘導作用を有する自己抗体の発現が傷害のリスク因子であるか否かを解明する。
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研究実績の概要 |
これまでの検討において、インドメタシン起因性小腸傷害は好中球依存的であること、蛍光2重免疫染色法を用いて本傷害において好中球細胞外トラップ(neutrophil extracellular traps: NETs)が形成されていることを確認した。本年度では、ヒトNSAIDs起因性小腸傷害サンプルを用いて、蛍光免疫二重染色を行い、NETsが好中球の酵素であるMPOと共発現することを示し、ヒトNSAIDs起因性小腸傷害においてもNETsが関与していることを明らかにした。 マウスの実験では、NETsは抗シトルリン化ヒストンH3 (Cit-H3)を含む細胞外DNA成分として同定されるため、抗Cit-H3抗体を用いたWestern Blottingを行ったところ、6時間をピークにCitH3の発現亢進と、PAD4の発現亢進を認め、結果としてNETsの発現が亢進していることが判明した。 NETsのNSAIDS起因性小腸傷害に対する働きをさらに明らかにするために、PAD4阻害薬であるCl-amidineおよびStreptonigrinを投与しNETs抑制することにより、本傷害がCl-amidine投与群で27%、streptonigrin投与群で52%軽減することを確認した。これらの結果より本傷害においてNETs形成が傷害促進的の働いている可能性が示唆された。また、PAD4 KOマウスに対してNSAIDS起因性小腸傷害を作成したところ、肉眼的にも分子生物学的にもNSAIDS起因性小腸傷害の改善をみとめ、PAD4を介した経路でNETsがNSAIDS起因性小腸傷害の悪化因子であることがさらにあきらかになった。 また、腸内細菌の関与をあきらかにするために、LPSをNSAIDs起因性小腸傷害モデルに投与したところ障害が悪化することが確認された。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
コロナの影響で輸入薬剤の納期が遅くなっていることおよび、PAD4ノックアウトマウスを導入したため、その準備に時間がかかったため。
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今後の研究の推進方策 |
実験計画時に計画した段階まで研究が進んでいる。現在のところ、NETsがNSAIDS起因性小腸傷害に深く関与していることは証明できている。そのため、現在の段階としては、実験結果を整理し論文として提出できる形にまとめている。 実験計画時には想定していなかった以上に研究が進んでおり、現在腸内細菌叢の関与を証明するために、マウスに抗生剤投与を行い、腸内細菌によるNETsの活性化についてを証明するための実験を行っている。 現在論文作成段階となっているため、論文投稿段階で追加実験が必要な際には追加実験ができるように、マウスの系統維持および、実験系の維持は引き続きおこなっている。
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