研究課題/領域番号 |
19K10261
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分57060:外科系歯学関連
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研究機関 | 新潟大学 |
研究代表者 |
岸本 直隆 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (50610911)
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研究分担者 |
佐藤 友里恵 (山田友里恵 / 山田 友里恵) 新潟大学, 医歯学系, 助教 (20804537)
瀬尾 憲司 新潟大学, 医歯学系, 教授 (40242440)
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研究期間 (年度) |
2022-11-15 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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配分額 *注記 |
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2020年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2019年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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キーワード | 脱分化脂肪細胞 / 顔面神経麻痺 / 再生医療 / 細胞抽出物 / 脂肪組織由来幹細胞 / 末梢神経再生 / cell extract / 末梢神経障害 |
研究開始時の研究の概要 |
顔面神経麻痺は表情筋の機能不全を伴い,発話や食事に影響を及ぼすことから患者QOLを著しく低下させる.そこで本研究では神経筋接合部の萎縮予防として脱分化脂肪細胞(DFATs)からcell extractを作製し,神経筋接合部へ投与することで顔面神経麻痺に対する新しい治療法の開発を目指す.近年,幹細胞を凍結・溶解して得られたcell extractによる臓器再生効果が報告されているが,DFATs由来cell extractを顔面神経再生に応用した研究はない.DFATs由来cell extractを顔面神経麻痺モデルへ移植し,神経筋接合部を中心とした運動神経の機能的・組織学的回復を評価する.
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研究実績の概要 |
マウス鼠径部から脂肪組織を採取し,コラゲナーゼ処理および遠心分離操作を行うことで,成熟脂肪細胞およびStromal vascular fraction(SVF)を分離した.SVFをフラスコに播種することで脂肪組織由来幹細胞(ADSCs)を、成熟脂肪細胞の浮力を利用した天井培養法により脱分化脂肪細胞(DFATs)をそれぞれ樹立した.ADSCs,DFATsを生理食塩水に懸濁し,凍結・溶解操作,遠心分離操作を加えることで,ADSCs由来の細胞抽出物(CE-ADSCs),DFATs由来の細胞抽出物(CE-DFATs)を作製した.Mouse Angiogenesis Array Kitを用いて解析したところ,CE-ADSCs,CE-DFATsともにCoagulation Factor III, FGF-2, HGF, Osteopontin, SDF-1, VEGFなど多数の血管新生関連タンパクを発現していた。CE-ADSCsを添加した培地を用いてラットSchwann細胞および脊髄後根神経節(DRG)ニューロンを培養することで,CE-ADSCsの添加がSchwann細胞を増殖させ,DRGニューロンの神経突起伸長を促進することが明らかとなった. 次に全身麻酔下でラットの下歯槽神経を切断し,同部に生体吸収性ハイドロゲルを足場としてCE-ADSCsを移植後に,神経再性能を神経マーカーであるProtein Gene Products 9.5を用いた免疫組織染色で評価した.コントロール群(生食移植)では切断側近位断端から放射状に乱雑な神経線維が伸長したのに対し,CE-ADSCs移植群では、神経線維が近位断端から遠位方向へ乱れなく伸長した様子が確認された.以上のことからCE-ADSCsおよびCE-DFATsの移植は神経再生治療における有用な選択肢となる可能性が示唆された.
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