| 研究課題/領域番号 |
19K10388
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分57070:成長および発育系歯学関連
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
藤原 卓 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 教授 (00228975)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2020年度)
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| 配分額 *注記 |
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2021年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2020年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2019年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
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| キーワード | Streptococcus mutans / Streptococcus sobrinus / 共培養 / う蝕 / ミュータンスレンサ球菌 / Streptococcus mutane |
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| 研究開始時の研究の概要 |
細菌学的疫学調査で，う蝕原性細菌としてS. mutansとS. sobrinusの両菌種が検出される小児では，どちらか一方の菌種しか検出されない小児に比較してう蝕が多く，昨今のう蝕の減少にもかかわらず依然として存在する重症う蝕群の多くは，この様な共感染群である可能性が高いと考えられる．
そこで重症う蝕発生そのメカニズムをS. mutansとS. sobrinus共感染にスポットを当てて，疫学調査およびグルコシルトランスフェラーゼに焦点をあてたin vitro実験で明らかにする．
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| 研究実績の概要 |
研究計画として， in vitro 実験と臨床データを用いる研究を予定していたが，新型コロナウィルス感染症の広がりによって臨床研究が困難になったためin vitro研究を中心に行った．
供試菌として，Streptococcus mutans MT8148株およびStreptococcus sobrinus 6715株を用いた．S. mutansとS. sobrinusの共培養実験を行うために，それぞれの株の抗生物質耐性変異株を作成した．
それぞれの野生株をBrain Heart Brothで培養し，培養液を遠沈して分離し菌を濃縮した．Streptomycin (SM) 500 μｇ/ｍL含有のMitis-Salivarius（MS）寒天平板に播種し,37℃で2日間培養した．培養後に出現したコロニーを釣菌し，単離作業を行った後，親株と同じミュータンスレンサ球菌であることを，マンニトール，ソルビトール，ラフィノース，メリビオースの糖発酵能を調べて確認した．現在，同様の手法によって，カナマイシン，エリスロマイシンに対する耐性株作成を試みている．
次いで，得られたストレプトマイシン耐性株を用いてS. mutansとS. sobrinusの共凝集および共培養実験を行った．
SM体制S. mutansとSM感受性S. soburinusを菌量の相対比を変化させながら，混合し，凝集を観察した．その後，適時希釈を行ってSMを含まないMS-寒天およびSM-MS寒天に混合液を播種し，コロニー数を計測した．
結果として，2菌種の混合による凝集および増殖コロニー数には，有意な差は見られなかった．今後，条件を変化させるとともに，培養上清などの添加実験を予定している．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
抗生物質耐性菌の作成に予想以上の時間がかかってしまったこと．
および新型コロナウィルス感染症の広がりにより，臨床分離株の分離や疫学調査が行えなかったため．
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| 今後の研究の推進方策 |
in vivo実験は今後も難しいと思われるので，in vitro実験を進める
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