| 研究課題/領域番号 |
19K10455
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分57080:社会系歯学関連
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| 研究機関 | 神奈川歯科大学 |
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研究代表者 |
平嶺 浩子 神奈川歯科大学, 歯学部, 講師 (30386841)
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| 研究分担者 |
浜田 信城 神奈川歯科大学, 歯学部, 教授 (20247315)
渡辺 清子 神奈川歯科大学, 歯学部, 准教授 (70148021)
児玉 利朗 神奈川歯科大学, 歯学部, 教授 (20170269)
小牧 基浩 神奈川歯科大学, 歯学部, 教授 (30401368)
山海 直 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所, 医薬基盤研究所 霊長類医科学研究センター, 再雇用職員 (80300937)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2019年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
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| キーワード | 歯周炎 / P. macacae / カニクイザル / Porphyromonas macacae |
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| 研究開始時の研究の概要 |
国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所霊長類医科学研究センターのサルを対象とした口腔内検診を行い、歯周炎に罹患したサルの存在を確認した。霊長類医科学研究センターのサルは、遺伝的背景が明確であり、生育環境が統一され、全身健康状態も管理されているため、追跡調査することが可能である。本研究では、歯周炎罹患サルの歯垢サンプルからの歯周炎の病原細菌の特定および分離株の病原因子を解明する。これまでヒトを対象とした研究では明らかにすることが困難であった細菌感染（時期と経路）と歯周病発症のプロセスに関する新たな知見とヒトへの伝播の可能性の検索にも寄与できるデータを構築できると考えている。
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| 研究実績の概要 |
本研究では、歯周炎罹患カニクイザルの歯垢サンプルからの歯周炎の病原細菌の特定および分離菌株の病原因子、伝播経路を解明することを目的としている。
当該年度（2022年）は、①口腔内検診にて、カニクイザル口腔内から綿棒を用いて歯垢を採取し、DNAを抽出し菌種特異的PCRプライマーを用いて菌種の存在と鑑別を行った。平板培地に塗抹し発育したBPAR分離菌株の性状検査を行い、菌種の同定を行った。②カニクイザルの歯周ポケットから分離されると報告されているPorphyromonas macacae (P. macacae)感染によりラット実験的歯周炎モデルを用いて、歯槽骨吸収について、マイクロCTを用いて評価を行った。また、ラット歯槽骨病理組織標本を作製し、破骨細胞誘導について比較検討を行った。その結果、①菌種特異的アミノ酸配列である16S ribosomal DNA (rDNA)をターゲットとし設計したprimerを使用した。カニクイザル口腔内から採取した歯垢細菌からDNA抽出を行い、PCR法を用いた結果P. macacaeは、全体の57%検出された。培養法にて口腔内細菌の分離・同定は、BHI血液寒天培地とPorphyromonas 選択培地であるKVLB培地を用いて行った。総菌数と黒色色素 産生嫌気性桿菌 (以下BPAR) の比率を算出した。歯垢の総菌数は、3群ともに同程度であった。また、BPARはYoung群(0-9歳)とOld群(20歳以上)を比較すると約5倍、Old群に多く検出された。BPAR分離菌株は、0-9歳に比べMidle群(10-19歳)では3倍検出され、Old群では5倍多く検出された。年齢とともにBPAR分離菌株検出率も増加することが分かった。②実験的歯周炎では、P. macacae感染群は、非感染群と比較し明らかな歯槽骨吸収が認められた。また、P. macacae感染群は、ヒト慢性歯周炎の原因細菌であるP. gingivalis 感染群とP. salivosa 感染群と同程度の歯槽骨吸収が認められた。ラット歯槽骨病理組織標本を作製し、TRAP染色を行い、破骨細胞を確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
2022年度は、引き続き、新型コロナウイルス感染症による影響のため、研究のための出張を自粛する期間があり、霊長類医科学 研究センターでのサル口腔内検診を実施できない期間があった。マイクロCTを用いたラットを用いた実験的歯周炎で歯槽骨吸収について検討した。P. macacae感染群は、非感染群と比較し明らかな歯槽骨吸収が認められたため、P. macacaeは、歯槽骨吸収に関わる病原性を有していることが分かった。菌種特異的PCRプライマーを用いてP. macacae の検出・同定を試みて、良好な結果が得られている。BPAR分離菌株は、性状検査を行いBPAR分離菌株の同定を行っていく。ラット歯槽骨病理組織標本の破骨細胞についての評価についても今後検討を行う。また、今後も検体数を増やしていく予定である。以上の結果については、全体的に良好な結果が得られている。
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| 今後の研究の推進方策 |
実験的歯周炎でラット歯槽骨の病理組織標本にTRAP染色を行い、破骨細胞について比較検討する。
菌種特異的PCRプライマーを用いてP. macacae の検出・同定を行う。BPAR分離菌株は、性状検査を行いBPAR分離菌株の同定を行っていく。感染伝播経路（垂直・水平）の検索のために、親子関係を調査する。感染伝播経路については、制限酵素切断パターンの比較検討する。
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