研究課題/領域番号 |
19K18586
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研究種目 |
若手研究
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配分区分 | 基金 |
審査区分 |
小区分56030:泌尿器科学関連
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研究機関 | 広島大学 |
研究代表者 |
関野 陽平 広島大学, 医系科学研究科(医), 助教 (30837810)
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研究期間 (年度) |
2022-12-19 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2020年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
2019年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
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キーワード | 前立腺がん / オルガノイド / 転写超保存領域 / 前立腺癌 / 癌幹細胞 |
研究開始時の研究の概要 |
前立腺癌オルガノイドを用いて、癌幹細胞特異的T-UCRを同定し、前立腺癌における発現解析および生物学的機能解析を行う。[1]前立腺癌オルガノイドの樹立[2]癌幹細胞特異的T-UCRの同定[3]同定したT-UCRの発現・機能解析 ① 発現解析 ② 幹細胞性の解析 ③ micro RNAとのinteraction ④ 薬剤感受性との関連 ⑤ 関連する遺伝子の網羅的解析
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研究実績の概要 |
本検討では前立腺癌オルガノイドを用いた癌幹細胞性、転写超保存領域の同定およびその機能解析を目的として解析をおこなった。5症例の前立腺癌オルガノイドと正常前立腺オルガノイドをサンプルに以前に前立腺癌で発現の上昇の報告を認めた26領域のTUCRについてqRT-PCRで発現を解析し、前立腺癌オルガノイドで発現の上昇しているT-UCRを同定した。さらに前立腺癌、非癌部をサンプルに同様にqRT-PCRで解析し、両者で発現の上昇を認めたUc.3+を同定した。Uc.3+についての報告はこれまで全く認められない。前立腺癌細胞株C4-2、22Rv-1を用いて、Uc.3+の強制発現株を作成した。オルガノイドは幹細胞性を維持する環境であり、Uc.3+が幹細胞性に関与すると考え、幹細胞マーカーとしてALDH1、CD44の発現を見たところ、Uc.3+強制発現株において上昇していた。スフェロイドアッセイをおこなったところ、Uc.3+強制発現株においてスフェロイドのサイズが亢進した。Uc.3+の機能解析をさらにすすめるためにsiRNAを用いてUc.3+を標的にノックダウンをこころみた。qRT-PCRでUc.3+がノックダウンされたことを確認した。Uc.3+をノックダウンさせると強制発現とは逆にALDH1、CD44の発現が減弱し、さらにスフェロイドのサイズが減弱した。現在、Uc.3+の強制発現株を用いてRNAシークエンスを行い、その結果を解析しているところである。
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