| 研究課題/領域番号 |
19K19295
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分57070:成長および発育系歯学関連
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
中條 真奈 (橋本真奈) 岡山大学, 医歯薬学域, 助教 (80824581)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2022年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2021年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2020年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2019年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
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| キーワード | FIB-SEM / 骨細胞 / コラーゲン線維 / 骨系細胞 / 直交配置型FIB-SEM / 歯槽骨改造 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
矯正力をかけて歯槽骨内の歯牙を移動させる歯科矯正治療において、歯槽骨改造の解明は矯正力の制御につながるため長年の課題である。歯槽骨改造の解明には、歯槽骨内における骨基質と細胞群の相互作用を解明することが重要であるが、ナノサイズのコラーゲン線維とマイクロサイズの細胞群とを広範囲に観察する際、解像度と観察範囲とのトレードオフ問題が障害となっていた。そこで本研究はこの問題を解決できる直交配置型FIB-SEMを用いて大規模三次元イメージングを行うことで、歯科矯正力に対する歯槽骨改造を解明することを目的とする。
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| 研究実績の概要 |
歯科矯正力による歯牙移動時の歯槽骨改造の解明には、歯槽骨内におけるコラーゲン線維を主とする基質成分と細胞成分との相互作用を解明することが重要である。本研究ではナノサイズのコラーゲン線維とマイクロサイズの骨系細胞群を高解像度かつ広範囲に観察し、三次元イメージングを行うことで、歯科矯正力に対する歯槽骨改造を解明することを目的としている。具体的には歯科矯正力を付与したマウス歯槽骨を直交配置型FIB-SEMや共焦点レーザー顕微鏡で観察し、Amiraソフトウェアで解析することを計画している。
本年の研究成果により、直交配置型FIB-SEMよりもさらに広範囲の観察が可能なプラズマFIB-SEMを用いて、歯科矯正力を1日間付与したマウス歯槽骨を観察することができた。観察時にFIB加工によりサンプルが破壊されることが数回生じたため、電子染色後の脱水、レジン置換、包埋、重合の過程のプロトコルを見直し、サンプル作製条件の改良を行った。この改良の結果、FIB-SEM観察中にサンプルが破壊されることなく観察が可能となった。また、観察対象であるマウスの上顎第一大臼歯が大きく遠心傾斜していることから、連続SEM観察を続けると観察範囲から観察対象が逸れることが判明した。そこで、レジン包埋したサンプルのトリミング方向や、観察時におけるステージへのサンプルの貼り付け方向、ステージの傾斜を調節することで、約1000枚の連続SEM観察を続けながら観察対象が逸れないように設定を変更した。プラズマFIB-SEMを用いることで、50 nm/voxelと高解像度ながら、観察範囲はおよそ200 μm×100 μm×50 μmと非常に広範囲な領域のデータが取得できた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初は直交配置型FIB-SEMでの観察を行う予定であったが、直交配置型FIB-SEMよりも広範囲の観察が可能なプラズマFIB-SEMを使用することとしたため、染色条件や観察条件の検討に時間がかかったことから、進捗状況はやや遅れているとした。
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| 今後の研究の推進方策 |
取得した画像の解析を進めていく。Amiraソフトウェアを用いて細胞群の抽出を行い、細胞体や細胞突起の三次元形態計測を行う予定である。細胞群の抽出には機械学習の応用も検討している。また、解析と同時にコントロールサンプルとして歯科矯正力を付与していないマウス歯槽骨のプラズマFIB-SEMを用いた観察を進める。歯槽骨サンプルは厚みがあるため、レジン重合時にサンプル作製が難しく、これまでFIB加工時にサンプルが破壊されることが多かったことから、今後も必要に応じてサンプルの再作製を行っていく。コントロールサンプルの画像取得後は、歯牙移動サンプルと同様の解析を行い、両者の細胞形態の違いを三次元的に検討する。
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