| 研究課題/領域番号 |
19K22336
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| 研究種目 |
挑戦的研究(萌芽)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
中区分40:森林圏科学、水圏応用科学およびその関連分野
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| 研究機関 | 愛媛大学 |
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研究代表者 |
北村 真一 愛媛大学, 沿岸環境科学研究センター, 准教授 (40448379)
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| 研究分担者 |
仲山 慶 愛媛大学, 沿岸環境科学研究センター, 講師 (80380286)
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| 研究期間 (年度) |
2019-06-28 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円)
2021年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円)
2020年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2019年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
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| キーワード | スクーチカ症 / トキソイド / Miamiensis avidus / プロテアーゼ / 細胞外プロテアーゼ / ワクチン / 病原性因子 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
多くの魚類寄生虫は生活史ごとに抗原性が変化するため、ワクチン開発は困難である。通常、ワクチンは病原体を抗原とするが、本課題では寄生虫が分泌する病原因子に注目し、ワクチンの開発を目指す。具体的には、ヒラメに被害をもたらす病原繊毛虫Miamiensis avidusの病原因子である分泌性プロテアーゼを分子レベルで特定し、それを大腸菌で大量合成し、魚類に免疫してワクチン効果を調べる。
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| 研究成果の概要 |
スクーチカ症の原因虫Miamiensis avidusが分泌する細胞外プロテアーゼのうち、病原性因子となっているプロテアーゼを特定するために、ゲノム編集実験を計画した。ゲノム編集実験に先立ち、本虫のタンパク質発現実験の条件検討を行ったが、哺乳類細胞およびテトラヒメナのプロモーターに加えて、本虫のハウスキーピング遺伝子のプロモーターを用いてもタンパク質発現を誘導できなかった。また、他の寄生虫で病原性因子として知られるカテプシンLを大量発現し、ヒラメに免疫し、その血清の不動化抗体価を測定したところ、100倍以上と高い抗体価が得られた。しかしながら、感染実験ではワクチンの有効性は確認できなかった。
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| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
ゲノム編集を行うために、スクーチカ症の原因繊毛虫Miamiensis avidusの組換体の作製を試みたが、同じ繊毛虫でモデル生物であるテトラヒメナと異なり、タンパク質発現実験が困難であることが明らかとなった。本課題で検討されたエレクトロポレーションの条件、プロモーター探索、形質転換体選択用の薬剤などの結果は、今後のM. avidusにおける組換体作製に重要な知見となる。
本虫の組換えカテプシンL（rCat）をヒラメに免疫したが、ワクチン効果は認められなかった。しかしながら、ヒラメ血清は本虫を不動化したことから、rCatは十分な抗原性を有することが明らかにされた。
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