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RNAi創薬を目指したRNAデリバリー技術の開発

研究課題

研究課題/領域番号 20015032
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関岡山大学

研究代表者

大槻 高史  岡山大学, 大学院・自然科学研究科, 准教授 (80321735)

研究期間 (年度) 2008 – 2009
研究課題ステータス 完了 (2009年度)
配分額 *注記
8,600千円 (直接経費: 8,600千円)
2009年度: 3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
2008年度: 4,800千円 (直接経費: 4,800千円)
キーワードshRNA / siRNA / RNAi / RNAキャリア / TatU1A / RNAデリバリー / 乳酸菌 / RNA結合蛋白質 / 光刺激 / CLIP-RNAi / キャリアペプチド
研究概要

最近、研究代表者らは、細胞内侵入性ペプチド(CPP)融合型RNA結合蛋白質(RBP)と、そのRBPの認識RNA配列につながったsiRNAを組み合わせて細胞内に導入する方法を開発した。昨年度からの本助成研究において手法の確立が進んだが、本年度はがん治療への応用を目指して、CPP-RBPによるRNA導入法に関して以下の検討を行った。
1) CPP-RBPでsiRNAを細胞内導入することにより、ヒトの大腸癌細胞由来株であるSW480株の増殖抑制が可能かどうかを検討した。大腸癌細胞由来株で特異的に発現しているK-Ras変異体遺伝子のRNAi法による発現抑制により、その増殖抑制を試みたが現状では顕著な増殖抑制効果は見られていない。今後のCPP-RBPの改良により明確な効果が現れることを期待している。
2) 腸内の癌の治療を目指し、乳酸菌にCPP-RBP/shRNAを合成させて腸内送達する方法の開発を目指す。現状ではshRNAのみを産生する乳酸菌株を作製し、マウスにおいてこの乳酸菌を投与することで特異的なRNAi効果が起こることを見いだした。今後CPP-RBPとshRNAの共発現系を内包する乳酸菌を作ることにより、このRNAi効果がより顕著になることを期待している。
3) 癌細胞で過剰発現がみられる膜蛋白質を標的とした抗体あるいはペプチドを、CPP-RBPに融合させることにより、CPP-RBP/shRNA複合体が癌細胞にのみ結合しやすくなり、それに伴いshRNAの細胞内導入効率RNAi効果が高まらないかと考えた。本年度はその例として卵巣癌や乳癌などで過剰発現がみられるErbB2に結合する蛋白質をCPP-RBPに融合させたものを作製した。現在、これにより通常のCPP-RBPと比べて癌細胞の増殖抑制効果が高まるかどうかを調べている。

報告書

(2件)
  • 2009 実績報告書
  • 2008 実績報告書
  • 研究成果

    (40件)

すべて 2010 2009 2008

すべて 雑誌論文 (12件) (うち査読あり 10件) 学会発表 (22件) 図書 (4件) 産業財産権 (2件) (うち外国 1件)

  • [雑誌論文] Lactobacillus-mediated RNA interference in nematode.2010

    • 著者名/発表者名
      Kuwahara, A.
    • 雑誌名

      Journal of Bioscience and Bioengineering 109

      ページ: 189192-189192

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Cellular siRNA delivery using cell-penetrating peptides modified for endosomal escape.2010

    • 著者名/発表者名
      Endoh, T.
    • 雑誌名

      Advanced Drug Delivery Reviews 61

      ページ: 704709-704709

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] A protease inhibitor discovery method using fluorescence correlation spectroscopy with position-specific labeled protein substrates.2009

    • 著者名/発表者名
      Nakata, H.
    • 雑誌名

      Anal.Biochem. 390

      ページ: 121125-121125

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Spatial regulation of specific gene expression through photoactivation of RNAi2009

    • 著者名/発表者名
      Endoh, T.
    • 雑誌名

      Journal of Controlled Release 137

      ページ: 241245-241245

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Carrier PNA for shRNA delivery into cells.2009

    • 著者名/発表者名
      Kitamatsu, M.
    • 雑誌名

      Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19

      ページ: 34103413-34103413

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] PNA arrays for miRNA detection2009

    • 著者名/発表者名
      Endoh, T., Kitamatsu, M., Sisido M. and Ohtsuki, T.
    • 雑誌名

      Chemistry Letters 38

      ページ: 438-439

    • NAID

      10025121754

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] 細胞内侵入性RNA結合蛋白質によるRNAデリバリー2009

    • 著者名/発表者名
      大槻高史
    • 雑誌名

      高分子 58(3)

      ページ: 140-141

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [雑誌論文] キャリアペプチドによるRNAの細胞内導入法2009

    • 著者名/発表者名
      大槻高史, 遠藤玉樹
    • 雑誌名

      生化学 81(2)

      ページ: 110-112

    • NAID

      10024915881

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [雑誌論文] Isolation of small RNAs using biotinylated PNAs2008

    • 著者名/発表者名
      Ohtsuki, T., Fujimoto, T., Kamimukai, M., Kumano, C., Kitamatsu, M., Sisido, M.
    • 雑誌名

      Journal of Biochemistry 144

      ページ: 415-418

    • NAID

      10024912545

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Modified uridines with C5-methylene substituents at the first position of the tRNA anticodon stabilize U.G wobble pairing during decoding2008

    • 著者名/発表者名
      Kurata, S., Weixlbaumer, A., Ohtsuki, T., Wada, T., Kirino, Y., Takai, K., Watanabe, K. Ramakrishnan, V. and Suzuki, T.
    • 雑誌名

      J. Biol. Chem. 283

      ページ: 18801-18811

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Amino acid sensing using aminoacyl-tRNA synthetase2008

    • 著者名/発表者名
      Kugimiya, A., Morii, M. and Ohtsuki, T.
    • 雑誌名

      Analytical Biochemistry 378

      ページ: 90-92

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Cellular siRNA delivery mediated by a cell-permeant RNA-binding protein and photoinduced RNA interference2008

    • 著者名/発表者名
      Endoh, T., Sisido M. and Ohtsuki, T.
    • 雑誌名

      Bioconjugate Chemistry 19

      ページ: 1017-1024

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] Development of nucleic acid delivery system for intestinal therapy using lactic acid bacteria2010

    • 著者名/発表者名
      Ryo Shintani
    • 学会等名
      第3回高度医療都市を創出する未来技術国際シンポジウム
    • 発表場所
      岡山
    • 年月日
      2010-02-03
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] siRNAデリバリーのためのCPP-RBP型RNAキャリアの開発2009

    • 著者名/発表者名
      桑原里奈
    • 学会等名
      第32回分子生物学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2009-12-12
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] 乳酸菌をキャリアとする核酸デリバリーシステムの開発2009

    • 著者名/発表者名
      新谷諒
    • 学会等名
      第32回分子生物学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2009-12-12
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] CLIP-RNAi法による光照射領域特異的な遺伝子発現抑制2009

    • 著者名/発表者名
      大槻高史
    • 学会等名
      第82回日本生化学会大会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      2009-10-23
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] Applications of peptide nucleic acids for RNA purification, RNA detection, and intracellular RNA delivery2009

    • 著者名/発表者名
      Takashi Ohtsuki
    • 学会等名
      The 6'th International Forum On Post-Genome Technologies
    • 発表場所
      北京
    • 年月日
      2009-09-17
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] CLIP-RNAi法による1細胞RNAiの経時的観察2009

    • 著者名/発表者名
      大槻高史
    • 学会等名
      第18回日本バイオイメージング学会
    • 発表場所
      岡山
    • 年月日
      2009-09-04
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] 酵素法を用いるアミノ酸の計測2009

    • 著者名/発表者名
      小原香・大槻高史・釘宮章光
    • 学会等名
      日本化学会第89春季年会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2009-03-27
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] RNAi創薬を目指した新規RNAキャリアの開発2009

    • 著者名/発表者名
      大槻高史
    • 学会等名
      第2回高度医療都市を創出する未来技術国際シンポジウム
    • 発表場所
      岡山
    • 年月日
      2009-02-05
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] アルギニン誘導体の蛋白質への位置特異的導入2008

    • 著者名/発表者名
      鈴江良隆, 大槻高史, 宍戸昌彦
    • 学会等名
      第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      2008-12-11
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 哺乳細胞を用いた非天然アミノ酸導入蛋白質合成法の開発2008

    • 著者名/発表者名
      土井芳朗, 大槻高史, 宍戸昌彦
    • 学会等名
      第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      2008-12-11
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] EF-Tu変異体によるアミノアシルtRNAの精製・定量法2008

    • 著者名/発表者名
      山本浩道, 土井芳朗, 大槻高史, 宍戸昌彦
    • 学会等名
      第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      2008-12-11
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] RNA-蛋白質ハイブリッド型FRETプローブを用いた低分子化合物の検出2008

    • 著者名/発表者名
      新谷諒、遠藤玉樹、三重正和、小畠英理、大槻高史、宍戸昌彦
    • 学会等名
      第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      2008-12-11
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] tRNA構造との対応関係を越えたショウジョウバエミトコンドリアEF-TuのtRNA認識能2008

    • 著者名/発表者名
      佐藤文、末松卓真、大槻高史、渡邊洋一
    • 学会等名
      第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会合同大会
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      2008-12-11
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Position specific incorporation of nonnatural amino acids into proteins in vivo2008

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Neki, Takashi Ohtsuki, and Masahiko Sisido
    • 学会等名
      21st Annual and International Meeting of Japanese Association for Animal Cell Technology
    • 発表場所
      Fukuoka
    • 年月日
      2008-11-25
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Improvement of CPP-RBD for siRNA delivery2008

    • 著者名/発表者名
      Rina Kuwabara, Tamaki Endoh, Masahiko Sisido, and Takashi Ohtsuki
    • 学会等名
      21st Annual and International Meeting of Japanese Association for Animal Cell Technology
    • 発表場所
      Fukuoka
    • 年月日
      2008-11-25
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 細胞内での非天然アミノ酸導入蛋白質合成法の開発2008

    • 著者名/発表者名
      土井芳朗, 大槻高史, 宍戸昌彦
    • 学会等名
      第3回バイオ関連化学合同シンポジウム
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2008-09-19
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] EF-Tu変異体を用いた非天然アミノアシルtRNAの精製と定量2008

    • 著者名/発表者名
      山本浩道, 土井芳朗, 大槻高史, 宍戸昌彦
    • 学会等名
      第3回バイオ関連化学合同シンポジウム
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2008-09-19
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] CLIP-RNAi -photoinduced RNAi strategy-2008

    • 著者名/発表者名
      Tamaki Endoh, Masahiko Sisido, Takashi Ohtsuki
    • 学会等名
      3rd International Workshop on Approaches to Single-Cell Analysis
    • 発表場所
      Zurich (Switzerland)
    • 年月日
      2008-09-11
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Construction of RNA-protein Hybrid for Bioimaging of Low-molecular Compounds2008

    • 著者名/発表者名
      Tamaki Endoh, Ryo Shintani, Masayasu Mie, Eiry Kobatake, Takashi Ohtsuki, Masahiko Sisido
    • 学会等名
      3rd International Workshop on Approaches to Single-Cell Analysis
    • 発表場所
      Zurich (Switzerland)
    • 年月日
      2008-09-11
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 細胞内生理活性分子検出のためのRNA-タンパク質ハイブリッド型FRETプローブの構築2008

    • 著者名/発表者名
      遠藤玉樹、新谷諒、三重正和、小畠英理、大槻高史、宍戸昌彦
    • 学会等名
      第10回RNAミーティング
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      2008-07-24
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 蛍光標識CPP-RBPによるRNAiの光誘導2008

    • 著者名/発表者名
      遠藤玉樹、宍戸昌彦、大槻高史
    • 学会等名
      第10回RNAミーティング
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      2008-07-24
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 蛍光標識CPP-RBPによるRNAデリバリーとRNAiの光制御2008

    • 著者名/発表者名
      遠藤玉樹、宍戸昌彦、大槻高史
    • 学会等名
      遺伝子・デリバリー研究会第8回シンポジウム
    • 発表場所
      大阪
    • 年月日
      2008-05-09
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [図書] 人工核酸によるRNAの検出と精製.In「シングルセル解析の最前線」2010

    • 著者名/発表者名
      大槻高史
    • 出版者
      シーエムシー出版
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [図書] Cellular siRNA delivery using TatU1A and photo-induced RNA interference. In "Methods Mol.Biol.vol.623, RNA Interference : From Biology to Clinical Applications"2010

    • 著者名/発表者名
      Endoh, T.
    • 出版者
      Springer
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [図書] The central dogma : from DNA to RNA, and to protein. In "Automation in Proteomics and Genomics"2009

    • 著者名/発表者名
      Ohtsuki, T.
    • 出版者
      Wiley
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [図書] The central dogma : from DNA to RNA, and to protein. In Automation in Proteomics and Genomics, eds by G. Alterovitz, R. Benson and M. Ramoni2009

    • 著者名/発表者名
      Ohtsuki, T. and Sisido M.
    • 総ページ数
      18
    • 出版者
      Wiley
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [産業財産権] 乳酸菌により二本鎖RNAを生成するキット及びその利用2009

    • 発明者名
      大槻高史、宍戸昌彦、公文裕巳、柏倉祐司、落合和彦
    • 権利者名
      岡山大学
    • 出願年月日
      2009-09-09
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 外国
  • [産業財産権] 乳酸菌により二本鎖RNAを生成するキット及びその利用2008

    • 発明者名
      大槻高史、宍戸昌彦、公文裕巳、柏倉祐司、落合和彦
    • 権利者名
      岡山大学
    • 出願年月日
      2008-10-30
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書

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公開日: 2008-04-01   更新日: 2018-03-28  

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