生体機能分子プローブによるRNAの時空間解析

• 研究課題/領域番号: 20300167
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 医用生体工学・生体材料学
• 研究機関: 東京工業大学
• 研究代表者: 小畠 英理 東京工業大学, 大学院・生命理工学研究科, 准教授 (00225484)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2010
• 研究課題ステータス: 完了 (2010年度)
• 配分額: 19,370千円 (直接経費: 14,900千円、間接経費: 4,470千円); 2010年度: 5,590千円 (直接経費: 4,300千円、間接経費: 1,290千円); 2009年度: 6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円); 2008年度: 7,280千円 (直接経費: 5,600千円、間接経費: 1,680千円)
• キーワード: RNA解析 / 生体機能分子プローブ / ルシフェラーゼ / ARM-ペプチド / 構造変化 / ARM-ペフチド / 生体機能分子プローグ / ルミフェラーゼ

研究概要

本研究は、細胞内で発現している特定RNAを時空間的に定量解析することを目的として行った。RNAの結合により構造変化を起こすペプチド配列の両末端に、発光酵素分割断片を連結した新規組換えタンパク質を構築した。このタンパク質とターゲットRNAに結合するRNAプローブを合成し、これらの組み合わせによりターゲットRNAを発光により高感度に検出できることを示した。また細胞内で発現しているRNAの検出にも成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Direct detection of RNAs in living cells using peptide-inserted Renilla luciferase (2011)
  • 著者名/発表者名: Takashi Andou, Tamaki Endoh, Masayasu Mie, Eiry Kobatake
  • 雑誌名: Analyst 巻: 136(12) ページ: 2446-2449
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of an RNA detection system using bioluminescence resonance energy transfer (2011)
  • 著者名/発表者名: Takashi Andou, Tamaki Endoh, Masayasu Mie, Eiry Kobatake
  • 雑誌名: Sensors and Actuators B 巻: 152 ページ: 277-284
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of small-ligand protein interactions by using T7 RNA polymerase with DNA-modified ligand (2010)
  • 著者名/発表者名: Masayasu Mie, Rie Sugita, Tamaki Endoh, Eiry Kobatake
  • 雑誌名: Anal. Biochem. 巻: 405(1) ページ: 109-113
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of small ligand-protein interaction by ligation reaction with DNA-modified ligand (2010)
  • 著者名/発表者名: Rie Sugita, Masayasu Mie, Hisakage Funabashi, Eiry Kobatake
  • 雑誌名: Biotechnol. Lett. 巻: 32(1) ページ: 97-102
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of small ligand-protein interaction by ligation reaction with DNA-modified ligand (2010)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al
  • 雑誌名: Biotechnol.Lett. 巻: 32(1) ページ: 97-102
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of small-ligand protein interactions by using T7 RNA polymerase with DNA-modified ligand (2010)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al
  • 雑誌名: Anal.Biochem. 巻: 405(1) ページ: 109-113
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction of a thermostable cell adhesion protein for reverse transfection (2010)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al
  • 雑誌名: J.Biotechnol. 巻: 150 ページ: 447-451
  • 査読あり
• [雑誌論文] RNA detection using peptide-inserted Renilla luciferase (2009)
  • 著者名/発表者名: Takashi Andou, Tamaki Endoh, Masayasu Mie, Eiry Kobatake
  • 雑誌名: Anal. Bioanal. Chem. 巻: 393(2) ページ: 661-668
  • 査読あり
• [雑誌論文] RNA detection using peptide-inserted Renilla luciferase (2009)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al.
  • 雑誌名: Anal.Bioanal.Chem. 巻: 393(2) ページ: 661-668
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recombination system based on Cre alpha complementation and leucine zipper fusions (2009)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al.
  • 雑誌名: Appl.Biochem.Biotechnol. 巻: 158 ページ: 334-342
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of bioactive small molecules by fluorescent resonance energy transfer in RNA-protein conjugate (2009)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al.
  • 雑誌名: Bioconjugate Chem. 巻: 20(12) ページ: 2242-2246
  • 査読あり
• [雑誌論文] RNA detection using peptide-inserted Renilla luciferase (2009)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al.
  • 雑誌名: Anal.Bioanal.Chem. 393(2) ページ: 661-668
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction of a multi-functional extracellular matrix proteinthat increases number of N1E-115 neuroblast cells having neuritis (2009)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al.
  • 雑誌名: J.Biomed.Mat.Res.B Appl.Biomater. 91(1) ページ: 425-432
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of bioactive small molecules by fluorescent resonance energy transfer in RNA-protein conjugate (2009)
  • 著者名/発表者名: E.Kobatake, et al.
  • 雑誌名: Bioconjugate Chem. 20(12) ページ: 2242-2246
  • 査読あり
• [学会発表] バイオセンシングのための生体分子プローブ設計 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小畠英理
  • 学会等名: 遺伝子・デリバリー研究会
  • 発表場所: 北海道大学
  • 年月日: 2010-06-03
• [学会発表] 生体分子プローブを利用したRNA検出法の開発 (2010)
  • 著者名/発表者名: 安藤高史、遠藤玉樹、三重正和、小畠英理
  • 学会等名: 第4回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 大阪大学豊中キャンパス
• [学会発表] バイオセンシングのための生体分子プローブ設計 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小畠英理
  • 学会等名: 遺伝子・デリバリー研究会 第10回シンポジウム
  • 発表場所: 北海道大学学術交流会館
• [学会発表] BRETを利用したRNAイメージング法の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 安藤高史、遠藤玉樹、三重正和、小畠英理
  • 学会等名: 第31回日本バイオマテリアル学会大会
  • 発表場所: 京都テルサ
• [学会発表] BRETを利用したDNAイメージング法の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 安藤高史、小畠英理, 他
  • 学会等名: 第31回日本バイオマテリアル学会大会
  • 発表場所: 京都テルサ
• [図書] コンビナトリアル・バイオエンジニアリング「無細胞タンパク質合成に基づいた酵素選択法」 (2010)
  • 著者名/発表者名: 高橋史生、小畠英理
  • 出版者: シーエムシー出版
• [図書] ソフトマテリアルの応用展開「ソフトマテリアルとしてのタンパク質・ペプチド」 (2010)
  • 著者名/発表者名: 三原久和、中村聡、小畠英理
  • 出版者: シーエムシー出版
• [図書] 酵素・タンパク質をはかる・とらえる・利用する「抗体でタンパク質をはかる」 (2009)
  • 著者名/発表者名: 小畠英理
  • 出版者: 工学図書