ニワトリ始原生殖細胞操作法の開発と形質転換ニワトリ作出への応用に関する研究

• 研究課題/領域番号: 20380156
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用動物科学
• 研究機関: 独立行政法人農業生物資源研究所
• 研究代表者: 内藤 充 独立行政法人農業生物資源研究所, 動物発生分化研究ユニット, 上級研究員 (70355733)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 18,720千円 (直接経費: 14,400千円、間接経費: 4,320千円); 2012年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円); 2011年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円); 2010年度: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円); 2009年度: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2008年度: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円)
• キーワード: 始原生殖細胞 / 外来遺伝子 / トランスフェクション / GFP遺伝 / ニワトリ初期胚 / 生殖系列キメラ / 品種識別 / 体外培養 / GFP遺伝子

研究概要

研究成果の概要(和文):本研究では、形質転換ニワトリ作出法の開発を目的として、初期胚より採取した始原生殖細胞をインビトロで長期に培養する方法を開発した。培養始原生殖細胞は、レシピエント胚生殖巣への移住能を有するとともに、正常な配偶子への分化能を保持していることが確認できた。また、培養始原生殖細胞へのGFP遺伝子の導入は可能で、GFP遺伝子を発現する培養始原生殖細胞をレシピエント胚生殖巣へ導入することに成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Expression of GFP Gene in Cultured PGCs Isolated from Embryonic Blood and Incorporation into Gonads of Recipient Embryos (2012)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T and Kuwana T
  • 雑誌名: The Journal of Poultry Science 巻: 49 号: 2 ページ: 116-123
  • DOI: 10.2141/jpsa.011094
  • NAID: 130004446358
  • ISSN: 1346-7395, 1349-0486
  • 査読あり
• [雑誌論文] Spermatogonial stem Cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Naito M
  • 雑誌名: Avian Biology Research 巻: 4 号: 2 ページ: 66-69
  • DOI: 10.3184/175815511x13069461860174
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vitro culture of testicular and ovarian gonocytes obtained from 19-day incubated chicken embryos and subsequent colonization into gonads of recipient embryos. (2011)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T, Kuwana T
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science 48 ページ: 112-118
  • NAID: 10028047602
  • 査読あり
• [雑誌論文] Allele-specific PCR typing and sequencing of the mitochondrial D-loop region in four layer breeds (2011)
  • 著者名/発表者名: Harumi T, Sano A, Minematsu T, Naito M
  • 雑誌名: Animal Science Journal 巻: 82 ページ: 223-226
  • NAID: 10030376136
  • 査読あり
• [雑誌論文] A new method for isolating viable gonadal germ cells from 7-day-old chick embryos (2011)
  • 著者名/発表者名: Nakajima Y, Minematsu T, Naito M, Tajima A
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science e 巻: 48 ページ: 106-111
  • NAID: 10028047579
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vitro culture of testicular and ovarian gonocytes obtained from 19-day incubated chicken embryos and subsequent colonization into gonads of recipient embryos (2011)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T, Kuwana T
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science 巻: 48 ページ: 112-118
  • NAID: 10028047602
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long Term in vitro Culture of Chicken Primordial Germ Cells Isolated from Embryonic Blood and Incorporation into Germline of Recipient Embryo (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T and Kuwana T
  • 雑誌名: The Journal of Poultry Science 巻: 47 号: 1 ページ: 57-64
  • DOI: 10.2141/jpsa.009058
  • NAID: 10026253120
  • ISSN: 1346-7395, 1349-0486
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long term in vitro culture of chicken primordial germ cells isolated from embryonic blood and incorporation into germline of recipient embryo. (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T, Kuwana T
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science 47 ページ: 57-64
  • NAID: 10026253120
  • 査読あり
• [雑誌論文] A method for cryopreserving semen from Yakido Roosters using N-methylacetamide as a cryoprotective agent. (2010)
  • 著者名/発表者名: Sasaki K, Tatsumi T, Tsutsui M, Niinomi T, Imai T, Naito M, Tajima A, Nishi Y
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science 巻: 47 ページ: 297-301
  • NAID: 10027656361
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long term in vitro culture of chicken primordial germ cells isolated from embryonic blood and incorporation into germline of recipient embryo (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T, Kuwana T
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science 47 ページ: 57-64
  • NAID: 10026253120
  • 査読あり
• [雑誌論文] Morphological characteristics of symmetrically developed ovaries in a 17-day incubated chicken embryo. (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T, Kuwana T
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science 47 ページ: 85-88
  • NAID: 10026253262
  • 査読あり
• [雑誌論文] Preferential Migration of Transferred Primordial Germ Cells to Left Germinal Ridge of Recipient Embryos in Chickens (2009)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Minematsu T, Harumi T and Kuwana T
  • 雑誌名: The Journal of Poultry Science 巻: 46 号: 1 ページ: 40-45
  • DOI: 10.2141/jpsa.46.40
  • NAID: 10024798951
  • ISSN: 1346-7395, 1349-0486
  • 査読あり
• [雑誌論文] Preferential migration of transferred primordial germ cells to left germinal ridge of recipient embryos in chickens. (2009)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Minematsu T, Harumi T, Kuwana T
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science 46 ページ: 40-45
  • NAID: 10024798951
  • 査読あり
• [雑誌論文] Migratory ability of chick primordial germ cells transferred into quail embryos. (2009)
  • 著者名/発表者名: Ishiguro S, Minematsu T, Naito M, Kanai Y, Tajima A
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 55 ページ: 183-186
  • NAID: 10024941745
  • 査読あり
• [雑誌論文] Preferential migration of transferred primordial germ cells to left germinal ridge of recipient embryos in chickens (2009)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Minematsu T, Harumi T, Kuwana T
  • 雑誌名: Journal of Poultry Science 46 ページ: 40-45
  • NAID: 10024798951
  • 査読あり
• [雑誌論文] Quantitative genotyping by amplifying the polymorphic sequences of Pre-Melanosomal Protein (PMEL17) gene using real-time polymerase chain reaction in chickens. (2008)
  • 著者名/発表者名: Minematsu T, Harumi T and Naito M
  • 雑誌名: British Poultry Science 巻: 49(5) 号: 5 ページ: 542-549
  • DOI: 10.1080/00071660802298310
  • 査読あり
• [雑誌論文] Germ cell-specific expression of GFP gene induced by chicken vasa homologue (Cvh) promoter in early chicken embryos (2008)
  • 著者名/発表者名: Minematsu T, Harumi T and Naito M
  • 雑誌名: Molecular Reproduction and Development 巻: 75(10) 号: 10 ページ: 1515-1522
  • DOI: 10.1002/mrd.20894
  • 査読あり
• [雑誌論文] Quantitative genotyping by amplifying the polymorphic sequences of Pre-Melanosomal Protein (PMEL17) gene using real-time polymerase chain reaction in chickens. (2008)
  • 著者名/発表者名: Minematsu T, Harumi T, Naito M
  • 雑誌名: British Poultry Science 49 ページ: 542-549
  • 査読あり
• [雑誌論文] Germ cell-specific expression of GFP gene induced by chicken vasa homologue (Cvh) promoter in early chicken embryos. (2008)
  • 著者名/発表者名: Minematsu T, Harumi T, Naito M
  • 雑誌名: Molecular Reproduction and Development 75 ページ: 1515-1522
  • 査読あり
• [雑誌論文] Germ cell-specific expression of GFP gene induced by chicken vasa homologue (Cvh) promoter in early chicken embryos (2008)
  • 著者名/発表者名: Minematsu T, Harumi T, Naito M
  • 雑誌名: Molecular Reproduction and Development 73 ページ: 1515-1522
  • 査読あり
• [雑誌論文] Quantitative genotyping by amplifying the polymorphic sequences of Pre-Melanosomal Protein (PMEL17) gene using real-time polymerase chain reaction in chickens (2008)
  • 著者名/発表者名: Minematsu T, Harumi T, Naito M
  • 雑誌名: British Poultry Science 49 ページ: 542-549
  • 査読あり
• [学会発表] PBS[-]法を用いたニワトリ5および9日胚からの生殖巣生殖細胞(GGCs)の分離 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中島友紀, 水野恵理子, 内藤充, 岡田一男, 秋葉よしえ, 田島淳史
  • 学会等名: 日本家禽学会2012年度春季大会
  • 発表場所: 名古屋大学東山キャンパス
  • 年月日: 2012-03-30
• [学会発表] 競合法を用いた始原生殖細胞(PGCs)移住能力評価法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 水野恵理子, 桑名貴, 大沼学, 内藤充, 中島友紀, 田島淳史
  • 学会等名: 日本家禽学会2012年度春季大会
  • 発表場所: 名古屋大学東山キャンパス
  • 年月日: 2012-03-30
• [学会発表] ニワトリとウズラのPCRによる識別と生殖系列キメラ胚の作出 (2012)
  • 著者名/発表者名: 内藤充, 春海隆, 桑名貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2012年度春季大会
  • 発表場所: 名古屋大学東山キャンパス
  • 年月日: 2012-03-30
• [学会発表] PMEL17遺伝子を利用したニワトリ品種識別と生殖系列キメラ判別への応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤 充・春海 隆・桑名 貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2011年度春季大会
  • 発表場所: 厚木
  • 年月日: 2011-03-28
• [学会発表] ニワトリ初期胚生殖巣からのCa2+依存性生殖巣生殖細胞(GGCs)遊離に及ぼすMg2+、培養温度およびEDTAの影響 (2011)
  • 著者名/発表者名: 中島友紀・峰松健夫・内藤充・田島淳史
  • 学会等名: 日本家禽学会2011年度春季大会
  • 発表場所: 東京農業大学厚木キャンパス(神奈川県厚木市)
  • 年月日: 2011-03-28
• [学会発表] PMEL17遺伝子を利用したニワトリ品種識別と生殖系列キメラ判別への応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤充・春海隆・桑名貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2011年度春季大会
  • 発表場所: 東京農業大学厚木キャンパス(神奈川県厚木市)
  • 年月日: 2011-03-28
• [学会発表] GFP遺伝子を発現するニワトリ始原生殖細胞の作出とレシピエント胚生殖巣への導入 (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤 充・春海 隆・桑名 貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2011年度秋季大会
  • 発表場所: 十和田
• [学会発表] GFP遺伝子を発現するニワトリ始原生殖細胞の作出とレシピエント胚生殖巣への導入 (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤充, 春海隆, 桑名貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2011年度秋季大会
  • 発表場所: 北里大学十和田キャンパス
• [学会発表] 新規分離法を用いて回収されたニワトリ生殖巣生殖細胞(GGCs)の移植による生殖系列キメラ個体の作製 (2011)
  • 著者名/発表者名: 中島友紀, 峰松健夫, 内藤充, 田島淳史
  • 学会等名: 日本畜産学会第114回大会
  • 発表場所: 北里大学十和田キャンパス
• [学会発表] Spermatogonial stem cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤充
  • 学会等名: First International Symposium on Propagation of Endangered Species of Birds.
  • 発表場所: Abu Dhabi, United Arab Emirates.
• [学会発表] Preferential migration of chicken primordial germ cells to left germinal ridge after transfer into recipient embryos (2011)
  • 著者名/発表者名: Naito M
  • 学会等名: 2nd International Workshop on Preservation of Avian Primordial Germ Cells and Its Usage
  • 発表場所: Okinawa, Japan
• [学会発表] A simple recovery of viable gonadal germ cells (GGCs) in domestic chickens (2011)
  • 著者名/発表者名: Nakajima Y, Minematsu T, Naito M, Tajima A
  • 学会等名: 2nd International Workshop on Preservation of Avian Primordial Germ Cells and Its Usage
  • 発表場所: Okinawa, Japan
• [学会発表] Spermatogonial stem cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Naito M
  • 学会等名: First International Symposium on Propagation of Endangered Species of Birds
  • 発表場所: Abu Dhabi, United Arab Emirates
• [学会発表] ニワトリ初期胚血液より採取した始原生殖細胞培養の試み (2010)
  • 著者名/発表者名: 内藤充・春海隆・桑名貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2010年度春季大会
  • 発表場所: 明治大学駿河台キャンパス、東京都千代田区
  • 年月日: 2010-03-30
• [学会発表] 孵卵19日目ニワトリ胚より採取した生殖細胞(gonocytes)培養の試み (2010)
  • 著者名/発表者名: 内藤充, 春海隆, 桑名貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2010年度春季大会
  • 発表場所: 明治大学駿河台キャンパス(東京都千代田区)
  • 年月日: 2010-03-30
• [学会発表] In vitro culture of chicken primordial germ cells isolated from embryonic blood (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T and Kuwana T
  • 学会等名: XIIIth European Poultry Conference
  • 発表場所: Tours, France,
• [学会発表] Basic studies for transgenic chickens. (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M
  • 学会等名: International Workshop on Preservation of Avian Primordial Germ Cells and Its Usage
  • 発表場所: Okinawa, Japan,
• [学会発表] In vitro culture of chicken primordial germ cells isolated from embryonic blood. (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T, Kuwana T.
  • 学会等名: XIIIth European Poultry Conference
  • 発表場所: Tours, France.
• [学会発表] Basic studies for transgenic chickens. (2010)
  • 著者名/発表者名: 内藤充.
  • 学会等名: International Workshop on Preservation of Avian Primordial Germ Cells and Its Usage.
  • 発表場所: Okinawa, Japan.
• [学会発表] Morphological characteristics of symmetrically developed ovaries in a 17-day incubated chicken embryo (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T, Kuwana T
  • 学会等名: XIIIth European Poultry Conference
  • 発表場所: Tours, France
• [学会発表] In vitro culture of chicken primordial germ cells isolated from embryonic blood (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Harumi T, Kuwana T
  • 学会等名: XIIIth European Poultry Conference
  • 発表場所: Tours, France
• [学会発表] Basic studies for transgenic chickens (2010)
  • 著者名/発表者名: Naito M
  • 学会等名: International Workshop on Preservation of Avian Primordial Germ Cells and Its Usage
  • 発表場所: Okinawa, Japan
• [学会発表] ウズラ胚に移植されたニワトリPGCsの移住性 (2009)
  • 著者名/発表者名: 石黒進, 峰松健夫, 内藤充, 金井幸雄, 田島淳史
  • 学会等名: 日本家禽学会2009年度春季大会
  • 発表場所: 日本大学生物資源科学部(神奈川県藤沢市)
  • 年月日: 2009-03-28
• [学会発表] ニワトリ初期胚血液より採取した始原生殖細胞培養の試み (2009)
  • 著者名/発表者名: 内藤充, 春海隆, 桑名貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2009年度春季大会
  • 発表場所: 日本大学生物資源科学部(神奈川県藤沢市)
  • 年月日: 2009-03-28
• [学会発表] 始原生殖細胞を利用した鳥類の生殖制御法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 内藤 充
  • 学会等名: 第102回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 奈良
• [学会発表] 始原生殖細胞を利用した鳥類の生殖制御法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 内藤充
  • 学会等名: 第102回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 近畿大学農学部、奈良県奈良市
• [学会発表] 始原生殖細胞を利用した鳥類の生殖制御法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 内藤充
  • 学会等名: 第102回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 近畿大学農学部(奈良県奈良市)
• [学会発表] 左右対称に発達した孵卵17日目ニワトリ胚卵巣の形態的特徴 (2009)
  • 著者名/発表者名: 内藤充, 春海隆, 桑名貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2009年度秋季大会
  • 発表場所: 琉球大学千原キャンパス(沖縄県西原町)
• [学会発表] ニワトリ始原生殖細胞の左右生殖隆起への移住頻度について (2008)
  • 著者名/発表者名: 内藤充, 峰松健夫, 春海隆, 桑名貴
  • 学会等名: 日本家禽学会2008年度秋季大会
  • 発表場所: 北里大学獣医学部(青森県十和田市)
  • 年月日: 2008-08-28
• [学会発表] Allele-specific PCR detection of single nucleotide polymorphisms in the chicken mitochondrial D-loop region (2008)
  • 著者名/発表者名: Harumi T, Minematsu T, Naito M
  • 学会等名: 23rd World's Poultry Congress
  • 発表場所: Brisbane, Australia
• [学会発表] Gonocytes obtained from testes or ovary of 20-day incubated chicken embryos contribute to germline lineage after transfer into bloodstream of recipient embryos (2008)
  • 著者名/発表者名: Naito M, Minematsu T, Harumi T, Kuwana T
  • 学会等名: 23rd World's Poultry Congress
  • 発表場所: Brisbane, Australia
• [学会発表] 生殖系列キメラにおける生殖巣生殖細胞（GGCs）の移住・増殖能力の評価
  • 著者名/発表者名: 水野恵理子・大沼学・内藤充・中島友紀・田島淳史
  • 学会等名: 日本家禽学会2013年度春季大会
  • 発表場所: 安田女子大学
• [学会発表] 希少鳥類種での始原生殖細胞培養技術の検討
  • 著者名/発表者名: 桑名貴・内藤充
  • 学会等名: 日本家禽学会2013年度春季大会
  • 発表場所: 安田女子大学
• [図書] 最新畜産ハンドブック（分担執筆） (2013)
  • 著者名/発表者名: 内藤 充
  • 総ページ数: 650
  • 出版者: 講談社
• [図書] 畜産技術発達史 12.鶏の人工孵化と雌雄鑑別技術(分担執筆)(畜産技術協会)(東京) (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤充
• [図書] 畜産技術発達史 35.採卵鶏の光線管理技術(分担執筆)(畜産技術協会)(東京) (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤充
• [図書] 畜産技術発達史 12.鶏の人工孵化と雌雄鑑別技術 (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤充
  • 出版者: 畜産技術協会
• [図書] 畜産技術発達史 35.採卵鶏の光線管理技術 (2011)
  • 著者名/発表者名: 内藤充
  • 出版者: 畜産技術協会
• [図書] 発生工学日本農学80年史(分担) (2009)
  • 著者名/発表者名: 内藤 充
  • 出版者: 養賢堂
• [図書] 日本農学80年史第33章家禽学 3.発生工学 (分担執筆) (2009)
  • 著者名/発表者名: 内藤 充
  • 総ページ数: 238
  • 出版者: 養賢堂
• [図書] 日本農学80年史 第33章家禽学(3)発生工学(分担執筆) (2009)
  • 著者名/発表者名: 内藤充
  • 総ページ数: 376
  • 出版者: 養賢堂