脂溶性リガンドから構築する脳神経変性疾患治療薬を目指した新規リード化合物の創製

• 研究課題/領域番号: 20590113
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 創薬化学
• 研究機関: 横浜薬科大学
• 研究代表者: 須原 義智 横浜薬科大学, 環境科学研究室, 准教授 (30297171)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2010
• 研究課題ステータス: 完了 (2010年度)
• 配分額: 4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円); 2010年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2009年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2008年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: 脂溶性ビタミン / 再生医療 / 脳神経変性疾患 / 治療薬 / 脂溶性リガンド / ゲノム創薬 / 有機合成化学 / コンビナトリアルケミストリー / ビタミンK / 分化誘導作用 / 脳神経変性疾患治療 / 合成化学 / コンビナトリアル合成 / イソプレノイド

研究概要

我々は脂溶性ビタミン類の中でも特にビタミンK に着目して脳神経変性疾患の治療薬となりうるリード化合物の探索を行った。ビタミンK 同族体のひとつであるメナキノン-4(MK-4)は、体内で生合成されてあらゆる組織に高濃度に存在しているため、MK-4の生合成反応は脳神経変性疾患治療薬を開発する上で重要なターゲットのひとつになると考えられる。そこでまず、脳神経変性疾患の治療薬となりうるリード化合物を創製していく一助として、ビタミンK の蛍光標識体や重水素標識体を合成して、MK-4への変換のメカニズムを解明すると同時に変換効率の高い化合物の探索を行った。また、ビタミンKの側鎖部分を修飾した化合物を合成し、マウス大脳由来神経幹細胞からニューロンへの分化誘導作用や核内受容体Steroid and Xenobiotic Receptor(SXR)を介した転写活性を検討した。

研究成果

• [雑誌論文] Synthesis of Novel Vitamin K_2 Analogues with Modification at the ω-Terminal Position and their Biological Evaluation as Potent Steroid and Xenobiotic Receptor (SXR) Agonists (2011)
  • 著者名/発表者名: SUHARA, Y.; WATANABE, M.; NAKAGAWA, K.; WADA, A.; ITO, M.; TAKEDA, K.; TAKAHASHI, K.; OKANO, T.
  • 雑誌名: Journal of Medicinal Chemistry 巻: (In press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of UBIAD1 as a novel human menaquinone-4 biosynthetic enzyme. (2010)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa K.; Hirota Y.; Sawada N.; Yuge N.; Watanabe M.; Uchino Y.; Okuda N.; Shimomura Y.; Suhara Y.; Okano T.
  • 雑誌名: Nature 468 ページ: 117-121
  • 査読あり
• [雑誌論文] Efficient synthesis and biological evaluation of demethyl geranylgeranoic acid derivatives. (2010)
  • 著者名/発表者名: Wada A.; Wang F.; Suhara Y.; Yamano Y.; Okitsu T.; Nakagawa K.; Okano T.
  • 雑誌名: Bioorg.Med.Chem. 18(16) ページ: 5795-806
  • 査読あり
• [雑誌論文] Structure-activity relationships in the conversion of vitamin K analogues into menaquinone-4. Substrates essential to the synthesis of menaquinone-4 in cultured human cell lines. (2010)
  • 著者名/発表者名: Suhara Y.; Wada A.; Tachibana Y.; Watanabe M.; Nakamura K.; Nakagawa K.; Okano T.
  • 雑誌名: Bioorg.Med.Chem. 18(9) ページ: 3116-3124
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of UBIAD1 as a Novel Human Menaquinone-4 Biosynthesis Enzyme (2010)
  • 著者名/発表者名: NAKAGAWA, K.; HIROTA, Y.; SAWADA, N.; YUGE, N.; WATANABE, M.; UCHINO, Y.; OKUDA, N.; SHIMOMURA, Y.; SUHARA, Y.; OKANO, T.
  • 雑誌名: Nature 巻: 468 ページ: 117-122
  • 査読あり
• [雑誌論文] Efficient Synthesis and Biological Evaluation of Demethyl Geranylgeranoic Acid Derivatives (2010)
  • 著者名/発表者名: WADA, A.; WANG, F.; SUHARA, Y.; YAMANO, Y; OKITSU T.; NAKAGAWA, K.; OKANO, T.
  • 雑誌名: Bioorgic & Medicinal Chemistry 巻: 18 ページ: 5795-5806
  • 査読あり
• [雑誌論文] Structure-activity Relationships in the Conversion of Vitamin K Analogues into Menaquinone-4. Substrates Essential to the Synthesis of Menaquinone-4 in Cultured Human Cell Lines. (2010)
  • 著者名/発表者名: SUHARA, Y.; WADA, A.; TACHIBANA, Y.; WATANABE, M.; NAKAMURA, K.; NAKAGAWA, K.; OKANO, T.
  • 雑誌名: Bioorgic & Medicinal Chemistry 巻: 18 ページ: 3116-3124
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synthesis of 2α-propoxy-1α,25-dihydroxyvitamin D_3 and comparison of its metabolism by human CYP24A1 and rat CYP24A1. (2009)
  • 著者名/発表者名: Saito N.; Suhara Y.; Abe D.; Kusudo T.; Ohta M.; Yasuda K.; Sakaki T.; Honzawa S.; Fujishima T.; Kittaka A.
  • 雑誌名: Bioorg.Med.Chem. 17(13) ページ: 4296-4301
  • 査読あり
• [雑誌論文] Elucidation of the mechanism producing menaquinone-4 in osteoblastic cells. (2009)
  • 著者名/発表者名: Suhara Y.; Wada A.; Okano T.
  • 雑誌名: Bioorg Med Chem Lett. 19(4) ページ: 1054-1057
  • 査読あり
• [雑誌論文] Elucidation of the Mechanism Producing Menaquinone-4 in Osteoblastic Cells (2009)
  • 著者名/発表者名: SUHARA, Y.; WADA, A.; OKANO, T.
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19 ページ: 1054-1057
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synthesis of 2α-Propoxy-1α, 25- dihydroxyvitamin D_3 and Comparison of Its Metabolism by Human CYP24A1 and Rat CYP24A1 (2009)
  • 著者名/発表者名: SAITO, N.; SUHARA, Y.; ABE, D.; KUSUDO, T.; OHTA, M.; SAKAKI, T.; HONZAWA, S.; FUJISHIMA, T.; KITTAKA, A.
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry 17 ページ: 4296-4301
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synthesis and development of biologically Active fluorescent-labeled vitamin K analogues and monitoring of their subcellular distribution. (2008)
  • 著者名/発表者名: Suhara Y.; Abe S.; Murakami A.; Shimomura Y.; Nakagawa K.; Kamao M.; Tsugawa N.; Okano T.
  • 雑誌名: Tetrahedron 64 ページ: 8789-8796
  • 査読あり
• [雑誌論文] Design, Synthesis and Structure-activi-ty Relationship of Vitamin K_2 Analogues : Evaluation of their Biological Activities with Human Cultured Cell Lines (2008)
  • 著者名/発表者名: SUHARA, Y., HIROTA, Y., NAKAGAWA, K., KAMAO, M., TSUGAWA, N., OKANO, T.
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry 16(6) ページ: 3108-3117
  • 査読あり
• [雑誌論文] Conversion of Phylloquinone (Vitamin K_1) into Menaquinone-4 (Vitamin K_2) in Mice : TWO POSSIBLE ROUTE FOR MENAQUINONE-4 ACCUMULATION IN CEREBRA OF MICE (2008)
  • 著者名/発表者名: OKANO, T., SHIMOMURA, Y., YAMANE, M., SUHARA, Y., KAMAO, M., SUGIURA, M., NAKAGAWA, K.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 283(17) ページ: 11270-11279
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synthesis and Development of Biologically Active Fluorescent-labeled Vitamin K Analogues and Monitoring of their Subcellular Distribution (2008)
  • 著者名/発表者名: SUHARA, Y., ABE, S., MURAKAMI, A., SHIMOMURA, Y., NAKAGAWA, K., KAMAO, M., TSUGAWA, N., OKANO, T.
  • 雑誌名: Tetrahedron 64 ページ: 8789-8796
  • 査読あり
• [雑誌論文] Vitamin K Status Is Associated with Vertebral Fracture in Japanese Women (2008)
  • 著者名/発表者名: TSUGAWA, N., SHIRAKI, M., SUHARA, Y., KAMAO, M., TANAKA, K., OKANO, T.
  • 雑誌名: Journal of Bone and Mineral Metabolism 26(1) ページ: 79-85
  • 査読あり
• [雑誌論文] Elucidation of the Mechanism Producing Menaquinone-4 in Dsteoblastic Cells (2008)
  • 著者名/発表者名: SUHARA, Y., WADA, A., OKANO, T.
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19 ページ: 1054-1057
  • 査読あり
• [雑誌論文] 化学的アプローチによるビタミンKの生理作用の解析と生理活性物質への応用
  • 著者名/発表者名: 須原義智、和田昭盛、中川公恵、鎌尾まや、津川尚子、岡野登志夫
  • 雑誌名: ビタミン (印刷中)
  • NAID: 110008686087
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synthesis of new vitamin K analogues as steroid and xenobiotic receptor (SXR) agonists : Insight into the biological role of the side chain part of vitamin K.
  • 著者名/発表者名: Suhara Y.; Watanabe M.; Motoyoshi S.; Nakagawa K.; Wada A.; Takeda K.; Takahashi K.; Tokiwa H.; Okano T.
  • 雑誌名: J.Med.Chem. (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synthesis of novel vitamin K_2 analogues with modification at the ω-terminal position and their biological evaluation as potent steroid and xenobiotic receptor (SXR) agonists.
  • 著者名/発表者名: Suhara Y.; Watanabe M.; Nakagawa K.; Wada A.; Ito Y.; Takeda K.; Takahashi K.; Okano T.
  • 雑誌名: J.Med.Chem. (in press)
  • 査読あり
• [学会発表] 側鎖末端に官能基を有する新規ビタミンK誘導体の合成と核内受容体SXRを介した転写活性の検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 須原義智、渡辺雅人、的場瞳、手塚量太、古川南、伊藤陽一、中川公恵、和田昭盛、武田収功、高橋和彦、岡野登志夫
  • 学会等名: 日本薬学会131年会
  • 発表場所: 静岡
  • 年月日: 2011-03-31
• [学会発表] 側鎖末端に官能基を有する新規ビタミンK誘導体の合成と核内受容体SXRを介した転写活性の検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 渡辺雅人, 的場瞳, 手塚量太, 古川南, 伊藤陽一, 中川公恵, 和田昭盛, 武田収功, 高橋和彦, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本薬学会第131年会
  • 発表場所: 静岡市・グランシップ(静岡県コンベンションアーツセンター)
  • 年月日: 2011-03-28
• [学会発表] 新規ビタミンK誘導体の核内受容体SXRを介した転写活性の検討 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智、渡辺雅人、元吉沙也加、中川公恵、和田昭盛、常盤広明、岡野登志夫
  • 学会等名: 第29回メディシナルケミストリーシンポジウム
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2010-11-17
• [学会発表] 新規ビタミンK誘導体の核内受容体SXRを介した転写活性の検討 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 渡辺雅人, 元吉沙也加, 中川公恵, 和田昭盛, 常盤広明, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第29回 メディシナルケミストリーシンポジウム
  • 発表場所: 京都市・京都テルサ
  • 年月日: 2010-11-17
• [学会発表] β-アミノ酸から構築する人工コラーゲンの創製 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智、武田収功、白木洋、高橋和彦
  • 学会等名: 第36回反応と合成の進歩シンポジウム-ライフサイエンスを志向した理論、反応および合成-
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2010-11-01
• [学会発表] β-アミノ酸から構築する人工コラーゲンの創製 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 武田収功, 白木洋, 高橋和彦
  • 学会等名: 第36回反応と合成の進歩シンポジウム-ライフサイエンスを志向した理論、反応および合成-
  • 発表場所: 名古屋市・ウインクあいち(愛知県産業労働センター)
  • 年月日: 2010-11-01
• [学会発表] 核内受容体SXRに作用する新規ビタミンK誘導体の合成と活性評価 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智、渡辺雅人、中川公恵、和田昭盛、岡野登志夫
  • 学会等名: 第54回日本薬学会支部大会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2010-10-02
• [学会発表] 核内受容体SXRに作用する新規ビタミンK誘導体の合成と活性評価 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 渡辺雅人, 中川公恵, 和田昭盛, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第54回日本薬学会関東支部会
  • 発表場所: 東京都・東京薬科大学
  • 年月日: 2010-10-02
• [学会発表] 化学的アプローチによるビタミンKの生理作用の解析と新規生理活性物質への応用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智、中川公恵、和田昭盛、武田収功、高橋和彦、岡野登志夫
  • 学会等名: 第52回天然有機化合物討論会
  • 発表場所: 静岡
  • 年月日: 2010-09-29
• [学会発表] 化学的アプローチによるビタミンKの生理作用の解析と新規生理活性物質への応用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 中川公恵, 和田昭盛, 武田収功, 高橋和彦, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第52回天然有機化合物討論会
  • 発表場所: 静岡市・グランシップ(静岡県コンベンションアーツセンター)
  • 年月日: 2010-09-29
• [学会発表] 新規ビタミンK誘導体による核内受容体SXRを介した転写活性の検討 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智、渡辺雅人、中川公恵、和田昭盛、高橋和彦、岡野登志夫
  • 学会等名: 日本ビタミン学会第62回大会
  • 発表場所: 盛岡
  • 年月日: 2010-06-11
• [学会発表] 新規ビタミンK誘導体による核内受容体SXRを介した転写活性の検討 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 渡辺雅人, 中川公恵, 和田昭盛, 高橋和彦, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本ビタミン学会第62回大会
  • 発表場所: 盛岡市・アイーナ(岩手県民情報交流センター)
  • 年月日: 2010-06-11
• [学会発表] 骨芽細胞におけるMenaquinone-4(MK-4)の生合成に対するBisphosphonateおよびStatinの相互作用の解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 中川公恵, 奥田直子, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 岡山・岡山大学
  • 年月日: 2010-03-30
• [学会発表] 新規環境変異原物質Dinitrofluoranthene類の変異原活性 (2010)
  • 著者名/発表者名: 伊藤陽一, 須原義智, 長田博, 高橋和彦
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 岡山・岡山大学
  • 年月日: 2010-03-30
• [学会発表] 再生医療を指向したβ-アミノ酸から構築する人工コラーゲンの創製 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智、武田収功、白木洋、高橋和彦
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2010-03-28
• [学会発表] 再生医療を指向したβ-アミノ酸から構築する人工コラーゲンの創製 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 武田収功, 白木洋, 高橋和彦
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 岡山・岡山大学
  • 年月日: 2010-03-28
• [学会発表] 化学的アプローチによるビタミンKの生理的役割の解明 (2010)
  • 著者名/発表者名: 須原義智
  • 学会等名: 第327回脂溶性ビタミン総合研究委員会
  • 発表場所: 東京・日本大学医学部第一臨床講堂
  • 年月日: 2010-03-05
• [学会発表] 高齢者のビタミンK不足マーカーおよび臨床骨折予測因子としての血清中低カルボキシル化オステオカルシン測定の意義 (2010)
  • 著者名/発表者名: 津川尚子, 白木正孝, 鎌尾まや, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第13回Vitamin K & Aging研究会
  • 発表場所: 東京・経団連会館 国際会議場
  • 年月日: 2010-02-20
• [学会発表] ビタミンKの脳神経細胞分化に対する作用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 中川公恵, 木村州作, 山根真紀子, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第13回Vitamin K & Aging研究会
  • 発表場所: 東京・経団連会館 国際会議場
  • 年月日: 2010-02-20
• [学会発表] ヒト骨芽細胞におけるMenaquinone-4生合成に対するキノン還元酵素の関与 (2009)
  • 著者名/発表者名: 弓削直人, 中川公恵, 澤田夏美, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本ビタミン学会第61回大会
  • 発表場所: 京都府・京都学園大学
  • 年月日: 2009-04-25
• [学会発表] ヒト骨芽細胞におけるメナキノン-4生合成に対するメバロン酸代謝経路阻害剤の影響 (2009)
  • 著者名/発表者名: 奥田直子, 中川公恵, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本ビタミン学会第61回大会
  • 発表場所: 京都府・京都学園大学
  • 年月日: 2009-04-25
• [学会発表] Menaquinone-4(MK-4)の軟骨細胞分化に対する作用 (2009)
  • 著者名/発表者名: 中川公恵, 奥田直子, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本ビタミン学会第61回大会
  • 発表場所: 京都府・京都学園大学
  • 年月日: 2009-04-25
• [学会発表] 曲率解析法を応用したビタミンK栄養の評価法の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 津川尚子, 小池さやか, 土井綾子, 高瀬友貴, 峯上卓也, 鎌尾まや, 須原義智, 上西一弘, 石田裕美, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本ビタミン学会第61回大会
  • 発表場所: 京都府・京都学園大学
  • 年月日: 2009-04-25
• [学会発表] メナキノン-4への変換に関するビタミンK誘導体の構造活性相関の検討 (2009)
  • 著者名/発表者名: 須原義智、和田昭盛、中村佳奈恵、渡辺雅人、岡野登志夫
  • 学会等名: 日本薬学会第129年会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2009-03-26
• [学会発表] メナキノン-4への変換に関するビタミンK誘導体の構造活性相関の検討 (2009)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 和田昭盛, 中村佳奈恵, 渡辺雅人, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本薬学会第128年会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2009-03-26
• [学会発表] 沖縄・兵庫・札幌の3地域における血中ビタミンD濃度調査 (2009)
  • 著者名/発表者名: 鎌尾まや, 津川尚子, 須原義智, 宮内章光, 越山裕行, 中村嘉夫, 真尾泰生, 原国政裕, 上西一弘, 田中清, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本薬学会第128年会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2009-03-26
• [学会発表] 曲率解析法を用いた新規ビタミンK栄養評価法の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 津川尚子, 小池さやか, 土井綾子, 高瀬友貴, 峯上卓也, 鎌尾まや, 須原義智, 上西一弘, 石田裕美, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本薬学会第128年会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2009-03-26
• [学会発表] 骨におけるMenaquinone-4 (MK-4)の生合成に対するBisphosphonateおよびStatinの影響 (2009)
  • 著者名/発表者名: 中川公恵, 奥田直子, 弓削直人, 澤田夏美, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第12回ビタミンK & Aging研究会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2009-02-14
• [学会発表] 微分解析法を用いたビタミンD必要量の評価 (2008)
  • 著者名/発表者名: 津川尚子, 高瀬友貴, 峯上卓也, 小池さやか, 土井綾子, 鎌尾まや, 須原義智, 上西一弘, 石田裕美, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第10回日本骨粗鬆症学会(骨ドック・検診分科会)
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2008-10-31
• [学会発表] 重水素標識化合物を用いたメナキノン-4の生合成反応機構の解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 中川公恵, 鎌尾まや, 津川尚子, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第58回日本薬学会近畿支部総会・大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2008-10-25
• [学会発表] 脳および骨はMenaquinone-4を合成する (2008)
  • 著者名/発表者名: 中川公恵, 下村祐加, 廣田佳久, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 第23回日本骨代謝学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2008-10-20
• [学会発表] 脳内ビタミンKの由来について (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡野登志夫, 中川公恵, 須原義智
  • 学会等名: 脂溶性ビタミ総合研究委員会第319回会議
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2008-10-14
• [学会発表] Conversion of Vitamin K Analogues to Menaquinone-4 in Osteoblastic Cells (2008)
  • 著者名/発表者名: SUHARA, Y., KAMAO, M., NAKAGAWA, K., TSUGAWA, N., OKANO, T.
  • 学会等名: 30^<th> Annual Meeting of the American Society for Bone and Mineral Research
  • 発表場所: Montreol
  • 年月日: 2008-09-14
• [学会発表] 重水素化ゲラニルゲラニルニリン酸を用いたメナキノン-4の生合成反応機構の解明 (2008)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 廣田件久, 中川公恵, 鎌尾まや, 津川尚子, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本ビタミン学会第60回夫会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2008-06-13
• [学会発表] 骨におけるMenaquinone-4の生合成 (2008)
  • 著者名/発表者名: 中川公恵, 廣田佳久, 須原義智, 岡野登志夫
  • 学会等名: 日本ビタミン学会第60回大会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2008-06-13
• [図書] 骨の健康と栄養科学大事典 (2009)
  • 著者名/発表者名: 森論史、江澤郁子、廣田孝子、鈴木隆雄、岡野登志夫、須原義智, 他
  • 出版者: 西村書店
• [図書] 骨の健康と栄養科学大事典 (2009)
  • 著者名/発表者名: 須原義智, 他
  • 総ページ数: 501
  • 出版者: 西松書店
• [備考] ホームページ等
  • URL: http://www.hamayaku.jp/teacher/te_65.html
• [備考]
  • URL: http://www.hamayaku.jp/teacher/te_65.html