GM-CSF中和能の新規アッセイ法の確立

• 研究課題/領域番号: 20659130
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 呼吸器内科学
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 中田 光 新潟大学, 医歯学総合病院, 教授 (80207802)
• 研究分担者: 田澤 立之 新潟大学, 医歯学総合病院, 講師 (70301041) ; 瀧澤 淳 新潟大学, 超域研究機構, 助教 (70463990)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2009
• 研究課題ステータス: 完了 (2009年度)
• 配分額: 3,200千円 (直接経費: 3,200千円); 2009年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円); 2008年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
• キーワード: 肺胞蛋白症 / 抗GM-CSF自己抗生 / 無細胞系 / 結合定数 / Soluble GM-CSF receptor / 抗GM-CSF自己抗体

研究概要

GM-CSF自己抗体価は、自己免疫性肺胞蛋白症の重症度と相関しない。我々は、中和能が治療予後とよく相関することを見出した。しかしながら、現行のTF-1細胞を用いたバイオアッセイ法は手技が煩雑な上、再現性に乏しい。GM-CSFシグナル伝達は、細胞膜上に存在しているGM-CSF受容体とGM-CSFが結合することによって惹起されている。そのため、soluble GM-CSF receptor(sGMR)を用いた無細胞系の中和能測定を目指している。平成20年度にトランスジェニックカイコを用いて組み替えヒトsGMRを得て、ビオチン標識したGM-CSFとプレートに固相化しsGMRを用いた無細胞アッセイを作成した。
平成21年度には、このアッセイを用いて、自己免疫性肺胞蛋白症の患者血漿からGM-CSFアフィニティ精製したGM-CSF精製抗体と患者血清中のIgG分画存在下で、GM-CSFとGM-CSF受容体の結合阻害能を調べた。その結果、従来の中和能測定法であるGM-CSF依存性のTF-1細胞を用いたバイオアッセイに比べ、再現性が良く、且つ結合阻害能と中和能は相関していた。このことから、無細胞アッセイで求めた結合阻害能がGM-CSF自己抗体の中和能を反映していることを示している。

研究成果

• [雑誌論文] High avidity cytokine autoantibodies in health and disease : Pathogenesis and Mechanisms. (2010)
  • 著者名/発表者名: Watanabe M, Uchida K, Nakagaki K, Trapnell BC, Nakata K
  • 雑誌名: Cytokine & Growth Factor Reviews (in Press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Patient-derived GM-CSF Autoantibodies Reproduce Pulmonary Alveolar Proteinosis in Non-human Primates. (2010)
  • 著者名/発表者名: Sakagami T, Beck D, Uchida K, Suzuki T, Carey BC, Nakata K, Keller G, Wood RE, Wert SE, Ikegami M, Whitsett JA, Luisetti M, Davies S, Krischer JP, Brody A, Ryckman F, Trapnell BC.
  • 雑誌名: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine (in Press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pulmonary alveolar proteinosis associated with dust inhalation : not secondary but autoimmune? (2010)
  • 著者名/発表者名: Costabel U, Nakata K.
  • 雑誌名: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 181 ページ: 427-428
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhaled Granulocyte/Macrophage-Colony Stimulating Factor as Therapy of Pulmonary Alveolar Proteinosis. (2010)
  • 著者名/発表者名: Tazawa R, Trapnell BC, Inoue Y, Arai T, Takada T, Nasuhara Y, Hizawa N, Kasahara Y, Tatsumi K, Hojo M, Ishii H, Yokoba M, Tanaka N, Yamaguchi E, Eda R, Tsuchihashi Y, Morimoto K, Akira M, Terada M, Otsuka J, Ebina M, Kaneko C, Nukiwa T, Krischer JP, Akazawa K, Nakata K.
  • 雑誌名: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine (in Press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative Study of High-Resolution CT Findings Between Autoimmune and Secondary Pulmonary Alveolar Proteinosis. (2009)
  • 著者名/発表者名: Ishii H, Trapnell BC, Tazawa R, Inoue Y, Akira M, Kogure Y, Tomii K, Takada ; T, Hojo M, Ichiwata T, Goto H, Nakata K,
  • 雑誌名: Chest. 136 ページ: 1348-1355
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of Th2-skewed pathology mediators in monocyte-derived type 2 of dendritic cells (DC2). (2009)
  • 著者名/発表者名: Hata M, Takahara S, Tsuzaki H, Ishii Y, Nakata K, Akagawa KS, Satoh K.
  • 雑誌名: Immunol Letter 126 ページ: 29-36
  • 査読あり
• [雑誌論文] HIdentification of MICA as a susceptibility gene for pulmonary Mycobacterium avium complex infection. (2009)
  • 著者名/発表者名: Shojima J, Tanaka G, Keicho N, Tamiya G, Ando S, Oka A, Inoue Y, Suzuki K, Sakatani M, Okada M, Kobayashi N, Toyota E, Kudo K, Kajiki A, Nagai H, Kurashima A, Oketani N, Hayakawa H, Takemura T, Nakata K, Ito H, Morita T, Matsushita I, Hijikata M, Sakurada S, Sasazuki T, Inoko
  • 雑誌名: The Journal of infectious diseases 199 ページ: 1707-1715
  • 査読あり
• [雑誌論文] Reciprocal CD4+T-CeII Balance of Effector CD62LIOW CD4+and CD62LhighCD25+CD4+Regulatory T Cells in Small Cell Lung Cancer Reflects Disease stage (2008)
  • 著者名/発表者名: Kenichi Koyama, Hiroshi Kagamu, Satoru Miura, ToruHiura, Takahiro Miyabayashi, Ryo Itoh, Hideyuki Kuriyama, Hiroshi Tanaka, Junta Tanaka, Hirohisa Yoshizawa, Koh Nakata, Fumitake Gejyo.
  • 雑誌名: Clin Cancer Res 14 ページ: 6770-6779
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characteristics of a large cohort of patients with autoimmune pulmonary alveolar proteinosis in Japan. (2008)
  • 著者名/発表者名: Inoue Y, Trapnell BC, Tazawa R, Arai T, Takada T, Hizawa N, Kasahara Y TatsumiK, Hoio M, Ichiwata T, Tanaka N, Yamaguchi E, Eda R, Oishi K, Tsuchihashi Y, Kaneko c, Nukiwa T, Sakatani M, Krischer J p, Nakata K
  • 雑誌名: Am J Respir Crit Care Med. 177 ページ: 752-762
  • 査読あり
• [学会発表] A Cell-Free Assay System To Estimate GM-CSF Neutralizing Capacity in Autoimmuno Pulmonary Alveolar Proteinosis (2009)
  • 著者名/発表者名: Urano S, Tomita M, Motoi N, Sato A, Trapnell BC, Nakata K
  • 学会等名: American Thoracic Society International Conference 2009
  • 発表場所: the United States of America (San Diego)
  • 年月日: 2009-05-18
• [学会発表] 教育講演肺胞蛋白症の最前線 (2008)
  • 著者名/発表者名: 中田 光
  • 学会等名: 第48回日本呼吸器学会学術講演会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2008-06-16
• [図書] EBM呼吸器疾患の治療一肺胞蛋白症 (2008)
  • 著者名/発表者名: 高田俊範中田光
  • 出版者: 中外医学社
• [産業財産権] 中和抗体など生理活性タンパク質の活性と拮抗し制御する物質の測定方法、生理活性タンパク質とその受容体との結合を制御する物質のスクリーニング方法、および、生理活性タンパク質の受容体への結合を制御する物質を検出するためのキット (2009)
  • 発明者名: 中田光, 他
  • 権利者名: 新潟大学、ネオシルク
  • 産業財産権番号: 2009-119320
  • 出願年月日: 2009-05-15