in vivo RMCE法の開発と、それを利用した疾患感受性遺伝子の機能解析

• 研究課題/領域番号: 20700368
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 実験動物学
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 大塚 正人 東海大学, 医学部, 講師 (90372945)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2010
• 研究課題ステータス: 完了 (2010年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2010年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2009年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2008年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
• キーワード: Cre-loxPシステム / RMCE法 / トランスジェニックマウス / 蛍光遺伝子 / 顕微注入法 / Rosa26遺伝子座位 / ノックダウン / Cre-loxpシステム / 疾患感受性遺伝子

研究概要

本研究では、ES細胞を介さず、狙った遺伝子座位へ目的遺伝子を導入するTgマウス作製新手法(in vivo RMCE法)を開発した。既に樹立した種マウス(Rosa26座位に変異loxP配列が挿入してあるもの)から得た受精卵に、変異loxP配列を有する導入ベクターをCreベクターと共導入し、目的のTg個体を得ることに成功した。これまでに25系統のTgラインを樹立しているが、得られたマウスの目的遺伝子発現は、強く、安定しており、再現性のあるものであった。本手法はノックダウンマウス作製にも有効であった。

研究成果

• [雑誌論文] Pronuclear injection-based mouse targeted transgenesis for reproducible and highly efficient transgene expression. (2010)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., Ogiwara S., Miura H., Mizutani A., Warita T., Sato M., Imai K., Hozumi K., Sato T., Tanaka M., Kimura M., Inoko H.
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res. 38
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pronuclear injection-based mouse targeted transgenesis for reproducible and highly efficient transgene expression. (2010)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., et al.
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res. 巻: 38
  • 査読あり
• [雑誌論文] Enrichment of xenograft-competent genetically modified pig cells using a targeted toxin, isolectin BS-I-64 conjugate (2010)
  • 著者名/発表者名: Akasaka E., et al.
  • 雑誌名: Xenotransplantation 17 ページ: 81-89
  • 査読あり
• [雑誌論文] A transposon-based chromosomal engineering method to survey a large cis-regulatory landscape in the mouse genome. (2009)
  • 著者名/発表者名: Kokubu C., Horie K., Abe K., Ikeda R., Mizuno S., Uno Y., Ogiwara S., Ohtsuka M., Isotani A., Okabe M., Imai K., Takeda J.
  • 雑誌名: Nat.Genet. 41 ページ: 946-952
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of CRTEIL and CETRIZ, Cre-loxP-based systems, which allow change of expression of red to green or green to red fluorescence upon transfection with a Cre expression vector. (2009)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., Warita T., Sakurai T., Watanabe S., Inoko H., Sato M.
  • 雑誌名: J Biomed Biotechnol. 985140
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recombinant DNA technologies for construction of precisely designed transgene constructs. (2009)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., Kimura, M., Tanaka, M., Inoko, H.
  • 雑誌名: Curr.Pharm.Biotechnol. 10 ページ: 244-251
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of CRTEIL and CETRIZ, Cre-loxP-based systems, which allow change of expression of red to green or green to red fluorescence upon transfection with a Cre expression vector (2009)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., et al.
  • 雑誌名: J Biomed Biotechnol. ページ: 985140-985140
  • 査読あり
• [雑誌論文] A transposon-based chromosomal engineering method to survey a large cis-regulatory landscape in the mouse genome (2009)
  • 著者名/発表者名: Kokubu C., et al.
  • 雑誌名: Nat.Genet. 41 ページ: 946-952
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of CRTEIL and CETRIZ, Cre-loxP-based systems, which allow change of expression of red to green or green to red fluorescence upon transfection with a Cre expression vector (2009)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., et.al.
  • 雑誌名: J Biomed Biotechnol (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recombinant DNA technologies for construction of precisely designed transgene constructs (2009)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., et.al.
  • 雑誌名: Curr. Pharm. Biotechnol. 10 ページ: 244-251
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cre-loxP System As a Versatile Tool for Conferring Increased Levels of Tissue-Specific Gene Expression from a Weak Promoter. (2008)
  • 著者名/発表者名: Nakamura S., Watanabe S., Ohtsuka M., Maehara T., Ishihara M., Yokomine T., Sato M.
  • 雑誌名: Mol.Reprod.Dev. 75 ページ: 1085-1093
  • 査読あり
• [雑誌論文] Major histocompatibility complex(Mhc)class Ib gene duplications, organization and expression patterns in mouse strain C57BL/6 (2008)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., et.al.
  • 雑誌名: BMC Genomics 9 ページ: 178-178
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cre-loxP System As a Versatile Tool for Conferring Increased Levels of Tissue-Specific Gene Expression from a Weak Promoter (2008)
  • 著者名/発表者名: Nakamura S., et.al.
  • 雑誌名: Mol. Reprod. Dev 75 ページ: 1085-1093
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted transgenesis through pronuclear injection of improved vectors into in vitro fertilized eggs.
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., Miura H., Nakaoka H., Kimura M., Sato M., Inoko H.
  • 雑誌名: Transgenic Res. in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cultivation with Untransfected Fibroblasts Stimulates Proliferation of a Single Gene-modified Fibroblast Derived from a Clawn Miniature Swine Fetus.
  • 著者名/発表者名: Sato M., et al.
  • 雑誌名: Reprod.Domest.Anim. 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted transgenesis through pronuclear injection of improved vectors into in vitro fertilized eggs.
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., et al.
  • 雑誌名: Transgenic Res. 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Loss of glial fibrillary acidic protein marginally accelerates disease progression in a SOD1^<H46R> transgenic mouse model of ALS.
  • 著者名/発表者名: Yoshii Y., et al.
  • 雑誌名: Neurosci.Res. 巻: (in press)
  • 査読あり
• [学会発表] Pronuclear injection-based targeted transgenesis for in vivo RNAi in the mouse (2010)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、木村穣、猪子英俊、大塚正人
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会 第83回日本生化学会大会 合同大会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド(兵庫)
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] Pronuclear injection-based targeted transgenesis for in vivo RNAi in the mouse (2010)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド(兵庫)
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] 高温感受性ラムダファージを利用した新規トランスジェニックマウス作出の試み (2010)
  • 著者名/発表者名: 本杉奈美
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド(兵庫)
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] Mouse targeted transgenesis throughpronuclear injection (2010)
  • 著者名/発表者名: Masato Ohtsuka Hiromi Miura, Minoru Kimura, Hidetoshi Inoko
  • 学会等名: Mouse Development, Genetics & Genomics2010, CSHL Meetings
  • 発表場所: Cold Spring Harbor, USA
  • 年月日: 2010-10-28
• [学会発表] Mouse targeted transgenesis through pronuclear injection (2010)
  • 著者名/発表者名: Masato Ohtsuka
  • 学会等名: Mouse Development, Genetics & Genomics
  • 発表場所: Cold Spring Harbor, USA
  • 年月日: 2010-10-28
• [学会発表] 受精卵への顕微注入による、マウス部位特異的遺伝子導入法の開発 (2010)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 第57回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 京都テルサ(京都)
  • 年月日: 2010-05-12
• [学会発表] 人工miRNA発現コンストラクトの作製、検証とノックダウンマウス作製 (2009)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、猪子英俊、木村穣、大塚正人
  • 学会等名: 第32回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2009-12-11
• [学会発表] マウス受精卵への顕微注入を介した、部位特異的遺伝子導入法の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、荻原早苗、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 第32回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2009-12-11
• [学会発表] マウス受精卵への顕微注入を介した、部位特異的遺伝子導入法の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人
  • 学会等名: 第32回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(神奈川県)
  • 年月日: 2009-12-11
• [学会発表] 人工miRNA発現コンストラクトの作製、検証とノックダウンマウス作製 (2009)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美
  • 学会等名: 第32回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(神奈川県)
  • 年月日: 2009-12-11
• [学会発表] Recombinase-mediated cassette exchange法を用いた、各種蛍光遺伝子発現トランスジェニックマウスの作製 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、荻原早苗、三浦浩美、安藤美貴子、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 第56回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 大宮ソミックシティ
  • 年月日: 2009-05-15
• [学会発表] Recombinase-mediated cassette exchange法を用いた、各種蛍光遺伝子発現トランスジェニックマウスの作製 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人
  • 学会等名: 第56回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 大宮ソニックシティ(埼玉県)
  • 年月日: 2009-05-15
• [学会発表] マウスMHCクラスIb遺伝子のゲノム構造と発現制御 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人
  • 学会等名: 第147回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 栃木県総合文化センター(栃木県)
  • 年月日: 2009-04-02
• [学会発表] RMCE法を用いた、赤色蛍光遺伝子tdTomatoトランスジェニックマウスの作製 (2008)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、荻原早苗、木村穣、猪子英俊、大塚正人
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会年会 第81回日本生化学会大会 合同大会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Recombinase-mediated cassette exchange法の確立と、それによるeGFPトランスジェニックマウスの作製 (2008)
  • 著者名/発表者名: 荻原早苗、木村穣、猪子英俊、大塚正人
  • 学会等名: 第55回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 仙台
• [学会発表] RMCE法を用いた、赤色蛍光遺伝子tdTomatoトランスジェニックマウスの作製 (2008)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
• [備考] ライカ顕微鏡フォトコンテスト2010優秀賞受賞
• [備考] 細胞工学Vol30 No.2 2011 p19Aに掲載