研究課題/領域番号 |
20770140
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研究種目 |
若手研究(B)
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配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
分子生物学
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研究機関 | 兵庫県立大学 |
研究代表者 |
塩見 泰史 兵庫県立大学, 大学院・生命理学研究科, 助教 (80380567)
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研究期間 (年度) |
2008 – 2009
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研究課題ステータス |
完了 (2009年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2009年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2008年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
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キーワード | 細胞周期 / DNA複製 / ユビキチン化 / タンパク質分解 / PCNA |
研究概要 |
(1)バキュロウイルスを用いた昆虫細胞発現系からユビキチンリガーゼCRL4^<Cdt2>を精製し、in vitroユビキチン化反応系を構築した。この反応系を用いて、CRL4^<Cdt2>によるCdt1、p21のユビキチン化を直接的に示した。(2)CRL4^<Cdt2>によるユビキチン化の標的となるにはPIPbox内にあるTD配列と、PIPboxから+3、+4アミノ酸下流にある2つ並んだ塩基性アミノ酸が必要であることを明らかにした。この結果から、基質がPCNAと複合体となった時、TD配列と2つの塩基性アミノ酸が外側に向かって立体配置をとり、基質となるシグナル(デグロン)をCRL4^<Cdt2>に提示する立体構造モデルを示した。(3)細胞内CRL4^<Cdt2>と相互作用する因子を質量分析により解析した結果、新規のユビキチン化標的因子の候補を見いだした。
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