がん治療薬の標的分子Chk1の新規・既知リン酸化反応の解析

• 研究課題/領域番号: 20790096
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 生物系薬学
• 研究機関: 愛知県がんセンター(研究所)
• 研究代表者: 笠原 広介 愛知県がんセンター(研究所), 発がん制御研究部, 研究員 (90455535)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2009
• 研究課題ステータス: 完了 (2009年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2009年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円); 2008年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: チェックポイント / DNA損傷 / リン酸化シグナル伝達 / 細胞周期 / 分指標的治療薬 / Chk1 / DNAダメージ / キナーゼ / リン酸化修飾 / リン酸化

研究概要

Chk1は、DNA障害チェックポイントの際にATRキナーゼによってセリン317及びセリン345がリン酸化される。このリン酸化によって、Chk1は立体構造が変化し、Chk1のキナーゼドメインと基質間の相互作用が亢進すると考えられているが、Chk1の詳細な活性制御メカニズムは未だ不明な点が多い。今回、我々は機能未知であるChk1のリン酸化反応からChk1の機能制御にアプローチし、以下のことを明らかにした。
1. DNA障害チェックポイントにおいて、ATRによってリン酸化されたChk1は活性化し、その後、自身のセリン296をリン酸化(自己リン酸化)することを明らかにした。また、セリン296がリン酸化されたChk1がドッキング蛋白質14-3-3のγサブタイプと直接結合すること、そして2量体形成した14-3-3がさらにCdc25Aと結合することで、Chk1/14-3-3γ/Cdc25Aの3者複合体が形成されることを見出した。この複合体形成により、Chk1はCdc25Aのセリン76をリン酸化し、Cdc25Aの蛋白質分解を誘導することが判明した。
2. 分裂期においてChk1はセリン286及びセリン301をサイクリン依存性キナーゼ1(CDK1)にリン酸化されることを同定した。さらに、このリン酸化は、分裂前期(prophase)においてChk1を核から細胞質へ排出を促すことを明らかにした。この機構により、細胞の分裂期進行が促進される。また、Chk1のセリン286及びセリン301はDNA障害チェックポイントにおいては、CDK2によってリン酸化されることも見出した。

研究成果

• [雑誌論文] Withaferin A targets intermediate filaments GFAP and vimentin in A model of retinal gliosis. (2010)
  • 著者名/発表者名: P. Bargagna-Mohan, R.R. Paranthan, A. Hamza, N. Dimova, B. Trucchi, C. Srinivasan, G.I. Elliott, C.G. Zhan, D.L. Lau, H. Zhu, K. Kasahara, M. Inagaki, F. Cambi, R. Mohan
  • 雑誌名: J Biol Chem. 285 ページ: 7657-7669
• [雑誌論文] Withaferin a targets intermediate filaments glial fibrillary acidic protein and vimentin in a model of retinal gliosis (2010)
  • 著者名/発表者名: P.Bargagna-Mohan, et al.
  • 雑誌名: The Journal of Biological Chemistry VOL.285 ページ: 7657-7669
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel positive feedback loop between Cycline-dependent kinase 1 (CDK1) ad CHK1 in the nucleus during the G2/M transition. (2009)
  • 著者名/発表者名: M. Enomoto, H. Goto, Y. Tomono, K. Kasahara, K. Tsujimura, T. Kiyono, M. Inagaki
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 284 ページ: 34223-3433
• [雑誌論文] Requirement of the SH4 and tyrosine-kinase domains but not the kinase activity of Lyn for its biosynthetic targeting to caveolin-positive Golgi membranes. (2009)
  • 著者名/発表者名: K. Ikeda, Y. Nakayama, M. Ishii, Y. Obata, K. Kasahara, Y. Fukumoto, N. Yamaguchi
  • 雑誌名: Biochim. Biophys. Aca. 1790 ページ: 1345-1352
• [雑誌論文] Differential trafficking of c-Src, Lyn, c-Yes, and Fyn is specified by the state of palmitoylation in the SH4 domain. (2009)
  • 著者名/発表者名: I. Sato, Y. Obata, K. Kasahara, Y. Nakayama, Y. Fukumoto, T. Yamasaki, K.K. Yokoyama, N. Yamaguchi
  • 雑誌名: J. Cell Sci. 122 ページ: 965-975
• [雑誌論文] Nuclear localization of Src-family tyrosine kinase is required for growth factor-induced euchromatinization. (2009)
  • 著者名/発表者名: A. Takahashi, Y. Obata, Y. Fukumoto, Y, Nakayama, K. Kasahara, T. Kuga, Y. Higashiyama, T. Saito, K.K. Yokoyama, N. Yamaguchi
  • 雑誌名: Exp. Cell. Re. 315 ページ: 1117-1141
• [雑誌論文] Novel positive feedback between Cdk1 and Chk1 in the nucleus during G2/M transition (2009)
  • 著者名/発表者名: Masato Enomoto, et al.
  • 雑誌名: The Journal of Biological Chemistry VOL.284 ページ: 34223-34030
  • 査読あり
• [雑誌論文] Differential traffcking of Ser, Lyn, Yes and Fyn is specified by the palmitoylation in the SH4 domain (2009)
  • 著者名/発表者名: Izumi Sato, et al.
  • 雑誌名: Journal of Cell Science VOL.122 ページ: 965-975
  • 査読あり
• [雑誌論文] Requirement of the SH4 and tyrosine-kinase domains but not the kinase activity of Lyn for its biosynthetic targeting to caveolin-positive Golgi membrane (2009)
  • 著者名/発表者名: Kikuko Ikeda, et al.
  • 雑誌名: Biochimica et Biophysica Acta (BBA) VOL.1790 ページ: 1345-1352
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nuclear localization of Src-family tyrosine kinase is required for growth factor-induced euchromatinization (2009)
  • 著者名/発表者名: Akinori Takahashi, et al.
  • 雑誌名: Experimental Cell Research VOL.315 ページ: 1117-1141
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chk1 phosphorylation at Ser286 and Ser301 occurs with both stalled DNA replication and damage checkpoint stimulation. (2008)
  • 著者名/発表者名: Y. Ikegami, H. Goto, T. Kiyono, M. Enomoto, K Kasahara, Y. Tomono, K. Tozawa, A. Morita, K. Kohri, M. Inagaki
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 377 ページ: 1227-1231
• [雑誌論文] Nuclear localization of Lyn tyrosine kinase mediated by inhibition of its kinase activity. (2008)
  • 著者名/発表者名: K. Ikeda, Y. Nakayama, Y. Togashi, Y. Obata, T. Kuga, K. Kasahara, Y. Fukumoto, N. Yamaguchi.
  • 雑誌名: Exp. Cell Re. 314 ページ: 3392-3404
• [雑誌論文] v-Src and c-Src, nonpalmitoylated Src-family kinases, control lysosome distribution via Rab7 in an SH2 domain-dependent manner. (2008)
  • 著者名/発表者名: K. Kasahara, Y. Nakayama, N. Yamaguchi.
  • 雑誌名: Caner Lett. 262 ページ: 19-27
• [雑誌論文] Nuclear localization of magphinins, alternative splicing products of the human trophinin gene. (2008)
  • 著者名/発表者名: J. Aoyama, Y. Akazawa, K. Kasahara, Y. Higashiyama, I. Kikuchi, Y. Fukumoto, S. Saburi, Y. Nakayama, M.N. Fukuda, N. Yamaguchi.
  • 雑誌名: J. Cel. Biochem. 103 ページ: 765-777
• [雑誌論文] Role of Src-family kinases in formation of the cortical actin cap at the dorsal cell surface. (2008)
  • 著者名/発表者名: T. Kuga, M. Hoshino, Y. Nakayama, K. Kasahara, K. Ikeda, Y. Obata, A. Takahashi, Y. Higashiyama, Y, Fukumoto, N. Yamaguchi
  • 雑誌名: Exp. Cell Re. 314 ページ: 2040-2054
• [雑誌論文] v-Src and c-Src, nonpalmitoylated Src-family kinases, control lysosome distribution via Rab7 in SH2 domain-dependent manner (2008)
  • 著者名/発表者名: Kousuke Kasahara
  • 雑誌名: Cancer Letters 262 ページ: 19-27
  • 査読あり
• [雑誌論文] hk1 phosphorylation at Ser286 and Ser301 occurs with both stalled DNA replication and damage checkpoint stimulation (2008)
  • 著者名/発表者名: Yosuke Ikegami
  • 雑誌名: Biochemical Biophysical Research Communications 377 ページ: 1227-1231
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nuclear localization of Lyn tyrosine kinase mediated by inhibition of its kinase activity (2008)
  • 著者名/発表者名: Kikuko Ikeda
  • 雑誌名: Experimental Cell Research 314 ページ: 3392-3404
  • 査読あり
• [学会発表] G2/M期におけるCdk1によるChk1の制御機構の解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 榎本将人
  • 学会等名: 第81回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸・神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2009-10-27
• [学会発表] 多彩なリン酸化によってチェックポイントキナーゼ1(Chk1)は機能修飾される (2009)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介
  • 学会等名: 第68回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜・パシフィコ横浜
  • 年月日: 2009-10-02
• [学会発表] The association between autophosphorylated Chk1 and 14-3-3 gamma is required for Chk1 function in DNA damage checkpoint (2009)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介
  • 学会等名: 第61回日本細胞生物学会大会
  • 発表場所: 名古屋・名古屋国際会議場
  • 年月日: 2009-06-03
• [学会発表] 多彩なリン酸化によってチェックポイントキナーゼ1(Chk1)は機能修飾される (2009)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介、後藤英仁、稲垣昌樹
  • 学会等名: 第68回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] Regulatory mechanism of Chk1 by its autophosphoryaltion in checkpoint response (2009)
  • 著者名/発表者名: Kasahara, K.
  • 学会等名: Global Center of Excellence (COE) Program 1st International Symposium "Signaling of Cancer Cells"
  • 発表場所: Nagoya
• [学会発表] 14-3-3γmediates Cdc25A proteolysis to induce S and G2 arrest after DNA damage. (2009)
  • 著者名/発表者名: Kasahara, K.
  • 学会等名: Global Center of Excellence (COE) Program 2nd International Symposium "Signaling of Cancer Cells"
  • 発表場所: Nagoya
• [学会発表] 14-3-3γmediates Cdc25A proteolysis to induce S and G2 arrest after DNA damage. (2009)
  • 著者名/発表者名: Goto, H., Kasahara, K., Tomono, Y., Enomoto, M., Kiyono, T., Inagaki, M.
  • 学会等名: The 49th Annual Meeting of the American Society for Cell Biology
  • 発表場所: San Diego
• [学会発表] The association between autophosphorylated Chk1 and 14-3-3gamma is required for Chk1 function in DNA damage checkpoint (2009)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介, 後藤英仁, 榎本将人, 友野靖子, 清野透, 稲垣昌樹
  • 学会等名: 第61回日本細胞生物学会大会
  • 発表場所: 名古屋
• [学会発表] G2/M期におけるCdk1によるChk1の制御機構の解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 榎本将人, 後藤英仁, 友野靖子, 笠原広介, 辻村邦夫, 清野透, 稲垣昌樹
  • 学会等名: 第82回日本生化学大会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Negative feedback regulation of Chk1 by its own kinase acitivity (2008)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介、後藤英仁、榎本将人、池上要介、友野靖子、稲垣昌樹
  • 学会等名: 2008年BMB2008(第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Negative feedback regulation of Chk1 by its own kinase activity (2008)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介、後藤英仁、榎本将人、池上要介、友野靖子、稲垣昌樹
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Chk1 phosphorylaiton by Cyclin-dependent kinase 1 promotes mitotic entry (2008)
  • 著者名/発表者名: Goto H., Enomoto M., Tomono Y., Kasahara K., Ikegami Y., Tsujimura K., Kiyono T., Inagaki M.
  • 学会等名: 2008 American Society for Cell Biology
• [学会発表] Ser-296 phosphorylation of Chk1 in checkpoint response (2008)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介、後藤英仁、池上要介、榎本将人、友野靖子、稲垣昌樹
  • 学会等名: 2008年第67回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋
• [学会発表] Autophosphorylation of Chk1 in checkpoint response (2008)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介、後藤英仁、池上要介、榎本将人、友野靖子、稲垣昌樹
  • 学会等名: 2008年第60回日本細胞生物学会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] 細胞増殖因子刺激により誘導されるユークロマチン化における核局在Src型チロシンキナーゼの役割 (2008)
  • 著者名/発表者名: 高橋明格、福本泰典、中山祐治、笠原広介、久家貴寿、小幡裕希、東山幸弘、山口直人
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Chk1 phosphorylation by Cyclin-dependent kinases (Cdks)
  • 著者名/発表者名: Enomoto, M., Goto, H., Ikegami, Y., Kasahara, K., Tomono, Y., Tsujimura, K., Kiyono, T., Inagaki, M.
  • 学会等名: International Symposium on Chromosome Dynamics in Ise
  • 発表場所: Shima
• [学会発表] Chk1 phosphorylation by Cyclin-dependent kinase 1 promotes mitotic entry
  • 著者名/発表者名: Goto, H., Enomoto, M. Tomono, Y., Kasahara, K., Ikegami, Y., Tsujimura, K., Kiyono, T. Inagaki, M.
  • 学会等名: The 48th Annual Meeting of the American Society for Cell Biology
  • 発表場所: San Francisco
• [図書] リン酸化によるM期制御-染色体サイクルゲノム恒常性維持、継承とダイナミクス-正井久雄、升方久夫、釣本敏樹、仁木宏典、篠原彰編 (2009)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介、後藤英仁
• [図書] 蛋白質・核酸・酵素染色体サイクル(2009年増刊号;54巻5号) (2009)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介
  • 出版者: 共立出版
• [図書] 細胞の構造と分裂終期-図説分子病態学-一瀬白帝、鈴木宏治編 (2008)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介、後藤英仁、稲垣昌樹
  • 出版者: 中外医学社
• [図書] 図説 分子病態学4版 (2008)
  • 著者名/発表者名: 笠原広介
  • 出版者: 中外医学社