| 研究課題/領域番号 |
20H02537
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分27040:バイオ機能応用およびバイオプロセス工学関連
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
西島 謙一 名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (10262891)
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| 研究分担者 |
金岡 英徳 愛知工業大学, 工学部, 准教授 (30631973)
小野 悦郎 九州大学, 医学研究院, 教授 (00160903)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
17,680千円 (直接経費: 13,600千円、間接経費: 4,080千円)
2023年度: 4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2022年度: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
2021年度: 4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2020年度: 5,720千円 (直接経費: 4,400千円、間接経費: 1,320千円)
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| キーワード | ニワトリ / 発育鶏卵 / 始原生殖細胞 / 遺伝子改変 / ワクチン / 卵 / 遺伝子改変ニワトリ / インフルエンザ |
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| 研究開始時の研究の概要 |
世界的流行の恐れから、インフルエンザワクチン生産法の抜本的改善が急がれている。発育鶏卵による従来法はワクチン生産に適した自動化機器類などが整備されており、今後もワクチンの大部分はこの方法により生産されるものと考えられる。本申請では、これまで開発してきた家禽の遺伝子操作技術を用いて新たなトランスジェニックニワトリを作製し、高力価なヒトインフルエンザワクチンを生産する新たな手法を提供することを目指す。本申請ではこのための基盤技術として精子を持たないニワトリ系統の作製も行う。ニワトリはワクチン生産だけでなく最も身近な家畜でもあり、本研究が完成されれば社会生活に対する影響は大きい。
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| 研究実績の概要 |
1．発育鶏卵でインフルエンザウイルス株の増殖には漿尿膜上に存在する糖鎖が必要であり、この糖鎖をヒト型化できれば、理論上ヒトウイルスを馴化プロセスなしで増やせるようになる。また、発育鶏卵での増殖が極端に低いワクチン株を効率よく増殖させることが可能となる。このために、Creリコンビナーゼを発現するニワトリと、プロモーターと糖転移酵素の間をスタッファーで区切った2種のニワトリ系統が必要となるが、後者の遺伝子導入PGCを移植した胚を孵化させて得た生殖腺キメラニワトリの交配を進めた。その結果目的のトランスジェニックニワトリ系統の樹立に成功した。生まれた個体はスタッファーとして挿入した蛍光タンパク質遺伝子を強く発現しており、スタッファーを除去した際には目的遺伝子を強く発現できることが期待された。成熟後の2系統のニワトリの交配を開始している。得られた卵を解析することで糖鎖変換とインフルエンザウイルスの増殖を評価する必要がある。
2．過剰発現させると培養PGCの増殖を阻害する糖転移酵素について、哺乳類においては酵素活性を失わせることが既知の変異体の遺伝子を導入したところ、やはり増殖が阻害されることが観察された。酵素活性に寄らない影響がある可能性が示唆される一方、酵素活性による影響の程度を評価する必要があることが示された。定量的な解析を行うための発現系を作製中である。
3. 減数分裂関連遺伝子の1つを片アレルでのみノックアウトしたPGCを移植して作製した生殖腺キメラニワトリを成熟させ、精子を採取して調べたところ移植したPGC由来の精子が含まれていることが示された。この個体を正常雌と交配し得られた次世代個体をスクリーニングしたが、目的のノックアウトニワトリは得られなかった。
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| 現在までの達成度 (段落) |
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
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