| 研究課題/領域番号 |
20H02695
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分32010:基礎物理化学関連
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| 研究機関 | 京都大学 (2023)
大阪大学 (2020-2022) |
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研究代表者 |
水野 操 京都大学, 理学研究科, 准教授 (10464257)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
17,680千円 (直接経費: 13,600千円、間接経費: 4,080千円)
2023年度: 2,990千円 (直接経費: 2,300千円、間接経費: 690千円)
2022年度: 3,380千円 (直接経費: 2,600千円、間接経費: 780千円)
2021年度: 4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2020年度: 6,630千円 (直接経費: 5,100千円、間接経費: 1,530千円)
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| キーワード | 分子光スイッチング / 時間分解共鳴ラマン分光法 / タンパク質ダイナミクス / 時間分解共鳴ラマン分光計測 / 時間分解紫外共鳴ラマン分光法 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
タンパク質機能発現の分子機構を明らかにするため、これまでに光受容タンパク質を対象とした時間分解分光計測が行われてきた。本研究では、光受容タンパク質以外の普遍的なタンパク質反応に対して、小分子の光化学反応に伴う構造変化を機能発現スイッチとして利用した時間分解共鳴ラマン分光計測により、原子レベルの空間スケールかつピコ秒からサブ秒までの幅広い時間スケールで過渡的なタンパク質分子運動の観測方法を確立する。
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| 研究実績の概要 |
タンパク質の機能は、外部刺激による構造変化により生み出される。タンパク質機能を生み出す過渡的な分子運動の観測には、反応のタイミングが同期した分子アンサンブルのスペクトルを計測し、時間的精度が高い良質なスペクトルを得る必要である。これに対して、光による反応タイミングの制御がきわめて有効である。実際に、光受容タンパク質では光が外部刺激として構造変化を誘発するため、反応中間体の構造研究が多く行われている。一方、多くのタンパク質では、機能発現スイッチに光が利用されることはなく、時間的精度が高いダイナミクス観測が困難であった。
本研究では、機能発現スイッチとして光反応により分子長や電荷分布が変化する小分子をタンパク質に導入し、反応タイミングの同期を行う（分子光スイッチング）。光によって誘起したタンパク質構造変化のダイナミクスを、芳香族アミノ酸残基および主鎖に由来するラマンバンドをプローブとして、時間分解紫外共鳴ラマン分光法により観測する。これにより、原子レベルの空間スケールかつピコ秒からサブ秒までの幅広い時間スケールで、機能発現に関わる構造ダイナミクスを観測する手法を確立する。
本年度は、新たに幅広い波長チューニングが可能なパルスレーザーを導入し、タンパク質ダイナミクス観測のさらなる高感度化を実現した。一方、試料調製方法について、昨年度から引き続き検討しているが、まだ実施には至っていない。外部機関の研究者との研究協力をあおぐ必要がある。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
光スイッチングを行うアゾベンゼンやスピロピランを導入したタンパク質試料の調製方法の確立が進んでおらず、タンパク質ダイナミクス観測を行うまで研究を推進できなかった。しかし、分光システムについては技術基盤が整ったために、今後の研究推進が可能である。
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| 今後の研究の推進方策 |
試料調製について、タンパク質化学修飾を実施している外部機関の研究者に助言をいただき、早急に実施する。スペクトル計測を行うための分光システムはすでに稼働しているため、これを用いて光スイッチングタンパク質のダイナミクス観測を行い、それらの機能発現における分子機構を解明する。
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