| 研究課題/領域番号 |
20J22501
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 審査区分 |
小区分49060:ウイルス学関連
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
三須 政康 奈良県立医科大学, 医学研究科, 特別研究員(DC1)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-24 – 2023-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2022年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2021年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2020年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | SFTS / モノクローナル抗体 / 治療 / 組換えウイルス |
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| 研究開始時の研究の概要 |
LC16m8（m8）をベースとしたSFTSウイルス膜糖タンパク質（GP）を発現する組換えm8（m8-SFTSV_GP）をマウスに接種することでSFTSウイルスに対する中和抗体の誘導、ワクチン効果を確認している。本研究ではこれを用いてin vivoで治療効果をもつSFTSウイルスGPに対するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマの樹立を目指す。また、中和活性評価、中和エピトープの決定を通じて、治療、さらには創薬への足がかりを築く。
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| 研究実績の概要 |
重症熱性血小板減少症候群（SFTS）は治療法の確立が急務となっている疾患の1つである。本研究では、感染阻止モノクローナル抗体（mAb）産生ハイブリドーマの樹立および、mAbのエピトープ解析を行うことでワクチンによる感染阻止メカニズムの解明を目標としている。
研究計画に従い、得られた候補のスクリーニング、限界希釈によるモノクローナル細胞株の樹立と解析を行った。スクリーニングを3回繰り返したところ、最終的に13の候補が得られた。産生された抗体が認識する抗原を調べるためにm8-Nまたはm8-GPの組換えワクシニアウイルスを感染させたRK13細胞を用いてIFAを行った。その結果、Nに反応した候補が6つ、GPに反応した候補が4つ確認された。この10の候補に対して96ウェルプレートを用いた限界希釈を行い、ハイブリドーマのモノクローナル細胞株の樹立を行った。また、抗GP抗体の認識部位（Gn側又はGc側）を確認するためにGn及びGc発現プラスミドを作製し、293T細胞にトランスフェクションした。上述した4つのハイブリドーマ培養上清を用いてIFAを実施したところ抗Gn抗体産生ハイブリドーマを１クローン、抗Gc抗体産生ハイブリドーマを3クローン樹立した。より詳細な評価を行うために、ハイブリドーマ培養上清から抗体の抽出及び精製を今後引き続き行う予定である。
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| 現在までの達成度 (段落) |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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