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ゲノム情報と構造・機能解析に基ずくアミノ酸代謝酵素の新規機能創製

研究課題

研究課題/領域番号 20K05816
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
審査区分 小区分38020:応用微生物学関連
研究機関大阪工業大学

研究代表者

大島 敏久  大阪工業大学, 工学部, 教授 (10093345)

研究期間 (年度) 2020-04-01 – 2025-03-31
研究課題ステータス 完了 (2024年度)
配分額 *注記
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2020年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
キーワードゲノム情報 / 酵素 / 酵素の機能と構造 / アミノ酸代謝酵素 / 酵素の新規機能創製 / 酵素応用 / アミノ酸代謝関連酵素 / 耐熱性酵素 / 機能と構造解析 / 酸化還元酵素 / 機能改変 / 人工酵素 / 好熱菌酵素のゲノムマイニング / アミノ酸脱水素酵素 / アラニン脱水素酵素の機能 / ロイシン脱水素酵素 / 酵素の構造と機能 / 人工脱水素酵素の創製 / タンパク質工学 / 酵素の産業応用 / 酵素リアクター / アミノ酸代謝 / L-アルギニン脱水素酵素 / L-アルギニン酵素分析 / 構造と機能 / 耐熱性酸化還元酵素 / アミノ酸脱炭酸酵素 / 酵素分析 / 新規アミノ酸代謝酵素
研究開始時の研究の概要

微生物由来の酵素は、食品や医薬品原料などの生産、加工、分析などにおける素子として有効利用されている。しかし酵素は本来生物が生命維持のために生産するもので、人工的な産業利用には必ずしも良好な性質を持つものではない。一方、近年、酵素の遺伝子情報や構造と機能の解析により、その機能を遺伝子レベルで合目的にデザインし、酵素遺伝子の編集による新規機能をもつ人工酵素を創製することが容易になってきた。本研究では,アミノ酸代謝関連酵素を対象に機能・構造解析、機能改変により産業利用に適した反応特異性、基質・補酵素特異性、触媒活性、安定性を持つ人工酵素を創製する。これにより酵素の産業利用に新たな道を開拓する。

研究成果の概要

本研究では、アミノ酸代謝に関係する新規酵素遺伝子をゲノム情報をもとに見出し、それら酵素遺伝子の大腸菌での発現、発現酵素の機能解析、立体構造解析、機能改良などを進め、その成果の産業応用への展開を図ることを主な目的とした。その結果、細菌L-アルギニン脱水素酵素を発見し、その酵素の機能と構造解析、L-アルギニンの新規酵素分析法への応用に成功した。また好熱性胞子形成菌に2種類の異なるアラニン脱水素酵素遺伝子を見つけ、1つが栄養増殖細胞に、他が胞子に機能していることを発見した。その他、新規耐熱性ロイシン脱水素酵素、meso-ジアミノピメリン酸脱水素酵素など数種の新規酵素を見出し、機能、構造解析を進めた。

研究成果の学術的意義や社会的意義

近年、微生物の膨大なゲノム情報から新規な目的酵素遺伝子を見出すことが容易になっている。本研究では、ゲノム情報をもとに、産業応用面で有用性期待できるアミノ酸代謝系の種々の酵素遺伝子を見出し、遺伝子の大腸菌での発現と生産、精製、機能と構造解析とそれらに基く機能改変を行い、新しい機能をもつ、酵素の創製とその応用面の開発を進めることを主な目的とする。その成果は、食品分析、医療分析、環境分析、医薬品の製造など、新しい応用開発への展開が期待でき、学術的、社会的意義は大きい。

報告書

(6件)
  • 2024 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2023 実施状況報告書
  • 2022 実施状況報告書
  • 2021 実施状況報告書
  • 2020 実施状況報告書
  • 研究成果

    (48件)

すべて 2025 2024 2023 2022 2021 2020

すべて 雑誌論文 (21件) (うち査読あり 14件、 オープンアクセス 7件) 学会発表 (25件) (うち国際学会 1件、 招待講演 4件) 図書 (2件)

  • [雑誌論文] Creation of catalytic activity-improved hyperthermophilic PQQ-dependent aldose sugar dehydrogenase and its efficient use for high performance electro-device2025

    • 著者名/発表者名
      Maeno Miku、Miki Yusuke、Ito Kazuki、Sakuraba Haruhiko、Ohshima Toshihisa、Suye Shin-ichiro、Satomura Takenori
    • 雑誌名

      Journal of Biotechnology

      巻: 398 ページ: 11-17

    • DOI

      10.1016/j.jbiotec.2024.11.017

    • 関連する報告書
      2024 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] アスパラギン酸経路における鍵酵素の構造生物学的研究2025

    • 著者名/発表者名
      林順司、大島敏久、櫻庭春彦
    • 雑誌名

      ビタミン

      巻: 99 ページ: 93-100

    • 関連する報告書
      2024 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Creation of a highly stable direct electron transfer-type enzyme sensor by combining a hyperthermophilic dehydrogenase and natural electron mediator2025

    • 著者名/発表者名
      Maeno Miku、Sakuraba Haruhiko、Ohshima Toshihisa、Suye Shin-ichiro、Satomura Takenori
    • 雑誌名

      Biotechnology Letters

      巻: 47 号: 3

    • DOI

      10.1007/s10529-025-03587-3

    • 関連する報告書
      2024 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] 耐熱性人工D-アミノ酸脱水素酵素の創製と利用2024

    • 著者名/発表者名
      大島敏久
    • 雑誌名

      月刊技術士(IPEJ Journal)

      巻: 11 ページ: 4-7

    • 関連する報告書
      2024 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Two different alanine dehydrogenases from Geobacillus kaustophilus: their biochemical characteristics and differential expression in vegetative cells and spores2023

    • 著者名/発表者名
      M. Maeno, T. Ohmori, D. Nukada, H. Sakuraba, T. Satomura, T. Ohshima
    • 雑誌名

      Biochim. Biophys. Acta, Proteins and Proteomics section

      巻: 1871 号: 4 ページ: 140904-140904

    • DOI

      10.1016/j.bbapap.2023.140904

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書 2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] First crystal structure of an NADP+-dependent l-arginine dehydrogenase belonging to the μ-crystallin family2023

    • 著者名/発表者名
      Kawakami Ryushi、Takami Naoki、Hayashi Junji、Yoneda Kazunari、Ohmori Taketo、Ohshima Toshihisa、Sakuraba Haruhiko
    • 雑誌名

      International Journal of Biological Macromolecules

      巻: 249 ページ: 126070-126070

    • DOI

      10.1016/j.ijbiomac.2023.126070

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] 新規アミノ酸脱水素酵素としてのNADP+依存性アルギニン脱水素酵素:特徴と利用2023

    • 著者名/発表者名
      大島敏久
    • 雑誌名

      ビタミン (vitamins)

      巻: 97 ページ: 352-353

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [雑誌論文] 酵素活性が向上した超好熱菌マルチ銅オキシダーゼ変異体の構造解析2023

    • 著者名/発表者名
      里村武範 , 平野達也 , 稲垣康平 , 堀永耕作 , 高村映一郎 , 坂元博昭 , 大志田達也 , 大島敏久 , 櫻庭春彦, 末信一朗
    • 雑誌名

      Photon Factory Activity Report

      巻: 2022 #40 ページ: 1-2

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • オープンアクセス
  • [雑誌論文] 好熱菌由来 D-セリン脱水素酵素の構造解析2023

    • 著者名/発表者名
      米田一博、櫻庭春彦、大島敏久
    • 雑誌名

      Photon Factory Activity Report

      巻: 2022 #40 ページ: 1-2

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [雑誌論文] ジャパン・ブルーとインジゴ還元酵素2023

    • 著者名/発表者名
      米田 一成, 櫻庭 春彦, 大島 敏久
    • 雑誌名

      化学と生物

      巻: 61 ページ: 9-11

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] 酵素活性が向上した超好熱菌マルチ銅オキシダーゼ変異体の構造解析 Structural analysis of hyperthermohilic multicopper oxidase mutant with enhanced enzyme activity2023

    • 著者名/発表者名
      里村武範, 平野達也, 稲垣康平, 堀永耕作, 高村映一郎, 坂元博昭, 大志田達也, 大島敏久, 櫻庭春彦, 末信一朗
    • 雑誌名

      Photon Factory Activity Report 2022

      巻: #40 ページ: 1-2

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [雑誌論文] 好熱菌由来 D-セリン脱水素酵素の構造解析 Structural analysis of D-serine dehydrogenase from thermophile2023

    • 著者名/発表者名
      米田一成, 櫻庭春彦, 大島敏久
    • 雑誌名

      Photon Factory Activity Report 2022

      巻: #40 ページ: 1-2

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [雑誌論文] Bacillus smithii 由来イサチン加水分解酵素の構造解析 Structural analysis of isatin hydrolase from Bacillus smithii2023

    • 著者名/発表者名
      米田一成, 櫻庭春彦, 大島敏久
    • 雑誌名

      Photon Factory Activity Report 2022

      巻: #40 ページ: 1-2

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [雑誌論文] NADP+-dependent L-arginine dehydrogenase from Pseudomonas veronii: purification, characterization and application to an L-arginine assay2022

    • 著者名/発表者名
      T. Ohshima, M. Tanaka, T. Ohmori
    • 雑誌名

      Protein Expression and Purification

      巻: 199 ページ: 106135-106135

    • DOI

      10.21203/rs.3.rs-860736/v1

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Pseudomonas veronii由来NADP+-依存性L-アルギニン脱水素酵素の機能解析とその応用(研究論文紹介)2022

    • 著者名/発表者名
      大島敏久、田中真輝、大森勇門
    • 雑誌名

      ビタミン (Vitamins)

      巻: 96 ページ: 467-470

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Conformational changes in the catalytic region are responsible for heat-induced activation of hyperthermophilic homoserine dehydrogenase,2022

    • 著者名/発表者名
      T. Kubota, E. Kurihara, K.Watanabe, K. Ogata, R. Kaneko, M. Goto, T. Ohshima, K. Yoshimune
    • 雑誌名

      International Journal of Biological Macromolecules

      巻: 5 号: 1 ページ: 704-704

    • DOI

      10.1038/s42003-022-03656-7

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Self-assembly of Aeropyrum pernix bacilliform virus 1 (APBV1) major Self- capsid protein and its application as building blocks for nanomaterials2022

    • 著者名/発表者名
      4. Y. Sumikama, A.Takashima, T. Mochizuki, H. Sakuraba, T. Ohshima , S. Sugihara, SI. Suye, T. Satomura
    • 雑誌名

      Extremophiles

      巻: 26 号: 3 ページ: 34-34

    • DOI

      10.1007/s00792-022-01284-x

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Crystal structure of a novel type of ornithine δ-aminotransferase from the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus horikoshii2022

    • 著者名/発表者名
      Kawakami Ryushi、Ohshida Tatsuya、Hayashi Junji、Yoneda Kazunari、Furumoto Toshio、Ohshima Toshihisa、Sakuraba Haruhiko
    • 雑誌名

      International Journal of Biological Macromolecules

      巻: 208 ページ: 731-740

    • DOI

      10.1016/j.ijbiomac.2022.03.114

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Characterization of a Novel Thermostable Dye-Linked L-Lactate Dehydrogenase Complex and Its Application in Electrochemical Detection2021

    • 著者名/発表者名
      T. Satomura, K. Uno, N. Kuosawa, H. Sakuraba,T. Ohshima, S. Suye
    • 雑誌名

      Int. J. Biol. Macrobiol.

      巻: 17;22(24) 号: 24 ページ: 13570-13570

    • DOI

      10.3390/ijms222413570

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Stereospecificity of hydride transfer and molecular docking in FMN-dependent NADH-indigo reductase of Bacillus smithii2021

    • 著者名/発表者名
      Kazunari Yoneda, Haruhiko Sakuraba, Tomohiro Araki, Toshihisa Ohshima
    • 雑誌名

      FEBS open bio

      巻: 11 号: 7 ページ: 1981-1986

    • DOI

      10.1002/2211-5463.13200

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] NADP-依存性D-アミノ酸脱水素酵素の機能改変2021

    • 著者名/発表者名
      櫻庭春彦、米田一成、大島敏久
    • 雑誌名

      Photon Factory Activity Report

      巻: 2020#38 ページ: 1-2

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • オープンアクセス
  • [学会発表] 超好熱好酸性アーキアSaccharolobus solfatoricusP2が持つ4種のグルタミン酸脱水素酵素の機能解析2025

    • 著者名/発表者名
      瀬川美菜子、大森勇門、岡部樹、平野将司、米田一成、櫻庭春彦、大島敏久
    • 学会等名
      日本農芸化学会2025年度大会
    • 関連する報告書
      2024 実績報告書
  • [学会発表] 電極用素子への応用を目指した耐熱性PQQ依存性アルドース脱水素酵素の構築2024

    • 著者名/発表者名
      前野美玖,伊藤一樹、櫻庭春彦、大島敏久,末信一郎
    • 学会等名
      日本農芸化学会2025年度大会
    • 関連する報告書
      2024 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] NAD(P)依存性-アミノ酸脱水素酵素の機能開発2024

    • 著者名/発表者名
      大島敏久
    • 学会等名
      生命システム原材料の起源と進化研究会&ThermusQ研究交流会
    • 関連する報告書
      2024 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 超好熱菌由来PQQ依存性アルドース脱水素酵素の酵素活性向上に関与するアミノ酸残基の同定2024

    • 著者名/発表者名
      伊藤一樹、前野美久、櫻庭春彦、大島敏久、末信一郎、里村武範
    • 学会等名
      日本農芸化学会 2024年度大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱性細菌由来 FMN-NADH 依存性インジゴ還元酵素の構造・機能解析2023

    • 著者名/発表者名
      米田一成,櫻庭春彦,荒木朋洋,大島敏久
    • 学会等名
      日本ビタミン学会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 新規アミノ酸脱水素酵素としての NADP+ 依存性アルギニン脱水素酵素:特徴と利用2023

    • 著者名/発表者名
      大島敏久
    • 学会等名
      ビタミンB研究協議会 第469回研究発表会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] Pseudomonas veronii 由来 L-アルギニン脱水素酵素の構造解析2023

    • 著者名/発表者名
      櫻庭春彦,高見直樹,林順司,米田一成,大森勇門,大島敏久
    • 学会等名
      ビタミンB研究協議会 第470回研究発表会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱菌の耐熱性アミノ酸脱水素酵素の機能開発2023

    • 著者名/発表者名
      大島敏久
    • 学会等名
      日本技術士会近畿本部 生物工学部会2023年10月例会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] Two different alanine dehydrogenases from Geobacillus kaustophilus: Their biochemical characteristics and differential expression in vegetative cells and spores2023

    • 著者名/発表者名
      T. Ohshima, M. Maeno,T. Ohmori , D. Nukada, H.Sakuraba, T. Satomura
    • 学会等名
      The International workshop Neotechnologies for ThermusQ initiative
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] 超耐熱性アルドース脱水素酵素への部位特異的変異導入によるKm改変2023

    • 著者名/発表者名
      大月裕香子, 村映一郎, 坂元博昭, 里村武範, 櫻庭春彦, 大島敏久, 末信一朗
    • 学会等名
      日本農芸化学会2023年大会(広島市)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Pseudomonas veronii由来NADP+-依存性L-アルギニン脱水素酵素の機能解析とその応用 (研究論文紹介)2022

    • 著者名/発表者名
      大島敏久
    • 学会等名
      第456回ビタミンB研究協議会(京都市)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 超好熱アーキアPyrococcus horikoshii 由来オルニチンアミノトランスフェラーゼの構造解析2022

    • 著者名/発表者名
      櫻庭春彦、大志田達也、川上竜巳、林順司、米田一成、里村武範、若山守、大島敏久
    • 学会等名
      第465回ビタミンB研究協議会(京都市)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱性最近由来FMN-NADH 依存性高度耐熱性インジゴ還元酵素の機能・構造解析2022

    • 著者名/発表者名
      米田一成、吉岡観、櫻庭春彦、荒木朋洋、大島敏久
    • 学会等名
      日本ビタミン学会第73回大会(福岡市)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 超好熱アーキア由来色素依存性D-乳酸脱水素酵素の構造解析2022

    • 著者名/発表者名
      林順司、大志田達也、川上竜巳、里村武範、若山守、大島敏久、櫻庭春彦
    • 学会等名
      日本ビタミン学会第73回大会(福岡市)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱菌 Geobacillus kaustophilus がもつ二つのアラニ ン脱水素酵素の機能解析2022

    • 著者名/発表者名
      前野美久、大島敏久、大森勇門
    • 学会等名
      日本農芸化学会2022年度大会 3C06-03
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 超好熱アーキアSulfurisphaera tokodaii由来ホモセリン脱水素酵素の熱処理による 活性化と構造変化2021

    • 著者名/発表者名
      久保田達哉、栗原恵梨夏、後藤勝、大島敏久、,吉宗一晃
    • 学会等名
      日本生化学会2021年度大会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱菌由来色素依存性 L- グルタミン酸脱水素酵素の性質の解析2021

    • 著者名/発表者名
      岩田 峻弥、伊藤 佑衣、櫻庭 春彦、大島 敏久、里村 武範、末 信一朗
    • 学会等名
      日本農芸化学会2022年度大会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱性Bacillus smishii由来FMN-NADH依存性インジゴ還元酵素の分子特性2021

    • 著者名/発表者名
      米田一成、吉岡観紗、櫻庭春彦、荒木朋洋、大島敏久
    • 学会等名
      日本ビタミン学会第73回大会 1-V-1
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 色素依存性 L- グルタミン酸脱水素酵素活性をもつ新規タンパク質の機能解析2021

    • 著者名/発表者名
      里村 武範、伊藤 佑衣、岩田峻弥、櫻庭 春彦、大島 敏久、末 信一朗
    • 学会等名
      日本ビタミン学会第73回大会 1-V-5
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱菌由来色素依存性L-グルタミン酸脱水素酵素の酵素化学的性質の解析2021

    • 著者名/発表者名
      伊藤佑衣、里村武範、高村映一郎、櫻庭春彦、大島敏久、末信一郎
    • 学会等名
      日本農芸化学会2021年度大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] 酵素活性が向上した超好熱菌由来ピロ露機のリンキノン依存性アルドース脱水素酵素の創製と酵素化学的性質の解明2021

    • 著者名/発表者名
      三木佑介、里村武範、坂元博昭、櫻庭春彦、大島敏久、末信一郎
    • 学会等名
      日本農芸化学会2021年度大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱菌酵素を素子としたアミノ酸駆動型高耐久性型バイオ電池の開発2021

    • 著者名/発表者名
      里村武範、堀水晃作、高村映一郎、坂元博昭、大島敏久、櫻庭春彦、末信一郎
    • 学会等名
      日本農芸化学会2021年度大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] NAD+-カーボンナノチューブを用いマルチエンザイム型バイオ電池の開発2021

    • 著者名/発表者名
      木村美智子、高村映一郎、坂元博昭、里村武範、櫻庭春彦、大島敏久、末信一郎
    • 学会等名
      日本農芸化学会2021年度大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] Bacillus smithii由来FMN-NADH依存性高度耐熱性インジゴ還元酵素の機能と構造解析2020

    • 著者名/発表者名
      米田一成、櫻庭春彦、荒木朋洋、大島敏久
    • 学会等名
      日本ビタミン学会 2020年度大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱菌由来酸化還元酵素を用いたバイオ電池の開発2020

    • 著者名/発表者名
      里村武範、堀永晃作、高村映一郎、坂元博昭、櫻庭春彦、大島敏久、末信一郎
    • 学会等名
      日本ビタミン学会 2020年度大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [図書] 極限環境微生物の先端科学と社会実装最前線; 好熱菌の補酵素NAD(P)の生合成:その機能と特徴2023

    • 著者名/発表者名
      櫻庭春彦、大島敏久
    • 総ページ数
      504
    • 出版者
      エヌ・ティ・エス
    • ISBN
      9784860438487
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [図書] ビタミ ン・バイオファクター総合事典2021

    • 著者名/発表者名
      櫻庭春彦、大島敏久
    • 総ページ数
      656
    • 出版者
      朝倉書店
    • ISBN
      9784254102925
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書

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公開日: 2020-04-28   更新日: 2026-01-16  

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