| 研究課題/領域番号 |
20K05831
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分38030:応用生物化学関連
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| 研究機関 | 立命館大学 |
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研究代表者 |
木村 幸恵 立命館大学, 立命館グローバル・イノベーション研究機構, 助教 (40855946)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2021年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2020年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
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| キーワード | 植物免疫応答 / トランスポーター / 受容体様キナーゼ / シロイヌナズナ / 糖トランスポーター / 細胞膜受容体 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
植物に感染した病原菌は，植物細胞内の糖を細胞外へ排出させ栄養源として利用する．その一方で，植物は細胞外の糖を細胞内へ回収することでそれを阻止している．この争奪戦には植物の細胞膜に局在する糖トランスポーター（輸送体）が関与する．本研究では，植物の免疫応答に重要な糖トランスポーターの活性制御機構を明らかにすることで，病原菌に対する植物の抵抗性強化を目指す．具体的には，糖トランスポーターの新奇活性制御因子の探索・同定に加えて，糖結合が示唆される受容体による糖トランスポーターの活性制御の検証を行う．
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| 研究実績の概要 |
植物に感染した病原菌は，植物細胞内の糖を細胞外へ排出させ栄養源として利用する．その一方で，植物は細胞外の糖を細胞内へ回収することでそれを阻止すると考えられている．この糖の争奪戦には植物の細胞膜に局在する糖トランスポーターが関与することが知られているが，その糖輸送活性の制御機構については不明な点が多く残されている．本研究は，植物の免疫応答に重要な糖トランスポーターの新奇活性制御因子を同定し，その活性制御機構を明らかにすることを目的とした．
まずガスクロマトグラフ質量分析を用いて，植物体の糖含有量を定量化した結果，糖トランスポーターの制御候補因子である細胞膜局在受容体様キナーゼが，そのキナーゼ活性を介して，細胞内の糖恒常性維持に関与していることが明らかになった．さらにその受容体様キナーゼの欠損変異体を，異なる濃度の糖含有培地で生育した結果，糖トランスポーター欠損変異体と同様の表現型を示した．
次に糖トランスポーターと受容体様キナーゼとのタンパク質間相互作用解析を行った．先行研究から免疫応答への関与が報告されている8種の糖トランスポーターと１種の受容体様キナーゼの細胞質領域にタグをつけた融合タンパク質をそれぞれ大腸菌から精製し，in vitro pull downを行なった．その結果，8種の中で6種の糖トランスポーターが受容体様キナーゼとin vitroで直接相互作用することが明らかになった．次に，受容体様キナーゼによる糖トランスポーターのタンパク質リン酸化を調べるためにin vitro kinase assayを行なった．その結果，受容体様キナーゼは相互作用する糖トランスポーターをin vitroでリン酸化することが示唆された．これらの結果から，この受容体様キナーゼが糖トランスポーターのリン酸化を介して，糖輸送制御に関与する可能性が示唆された．
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