| 研究課題/領域番号 |
20K06060
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分39040:植物保護科学関連
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| 研究機関 | 尚絅大学 |
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研究代表者 |
光増 可奈子 尚絅大学, 生活科学部, 助教 (00711839)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | チラミン受容体 / 同定 / 機能解析 / 生体アミン受容体 / 植物寄生性線虫 / 行動制御 / 化合物スクリーニング / 防除 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
植物寄生性線虫の感染行動を支配する生体アミン受容体を同定し、その受容体を標的とする新規線虫防除剤の開発を目指す。〈１〉線虫の受容体遺伝子の単離と機能解析、〈２〉線虫の神経系における各受容体の発現解析、及び線虫の感染行動との関連の解析、〈３〉受容体発現培養細胞系を用いた化合物の一次スクリーニング、〈４〉化合物処理による線虫の感染行動の変化を指標とした二次スクリーニングを経てリード化合物を得る、という流れで研究を計画、遂行する。
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| 研究実績の概要 |
サツマイモネコブセンチュウ（Meloidogyne incognita）のチラミン受容体候補MiSER-2について、前年度に引き続き機能解析を進めた。MiSER-2安定発現CHO-K1細胞を用いた場合TA濃度依存的な応答が見られるが、未処理CHO-K1細胞ではチラミン応答は確認されなかった。チラミンのアンタゴニストであるヨヒンビンを同時に処理したところ、MiSER-2のチラミン応答はヨヒンビン濃度依存的に阻害された。これらのことから、MiSER-2がM. incognitaのチラミン受容体であることが証明された。M. incognitaで初めて生体アミン受容体を同定した報告となる。また、モデル線虫であるCaenorhabiditis elegansではSER-2以外のチラミン受容体も複数報告されていることから、M. incognitaにおける相同遺伝子を探索し、現在までに更に3種類のチラミン受容体相同遺伝子を単離している。これらについても機能解析を進め、種々の化合物を用いた活性物質のスクリーニングを行う。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
受容体候補の機能解析の際に、発現系の選定が必要となり、予定になかった検討事項が増えたことで進捗が遅れた。新型コロナ感染拡大の影響により、実験が実施できないために実験スケジュール自体を先送りしたり、実験消耗品や試薬の調達が滞るなどしたことや、所属機関における職務との両立に一時的な困難が生じ、前年度よりの遅れを取り戻すことなく、研究の進行が予定より遅れることとなった。
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| 今後の研究の推進方策 |
新たに条件検討した培養細胞系を用いてTARの機能解析を引き続き進める。検出感度が著しく低いという問題に対しては、安定発現細胞を取得してアッセイに用いることで改善を図る。薬剤スクリーニングには既知の基本的な生体アミン受容体アゴニスト含め、手持ちの天然物由来化合物等を用いるとともに、市販の化合物ライブラリーを用い、応答が見られたら行動解析に用いる。また、行動解析からも双方向的に化合物スクリーニングを行い、個体レベルでも活性を示す化合物を探索する。新たに同定したM. incognitaのTAR候補配列についてもアッセイ系の構築及び化合物スクリーニングを進め、個体において観察された行動異常が、どのTARを介したシグナル伝達によって惹起されるかを明らかにする。
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