| 研究課題/領域番号 |
20K06493
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分43010:分子生物学関連
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| 研究機関 | 立命館大学 |
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研究代表者 |
萬年 太郎 立命館大学, 生命科学部, 助教 (50535763)
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| 研究分担者 |
八谷 如美 地方独立行政法人東京都立産業技術研究センター, 開発本部開発第二部バイオ応用技術グループ, 主任研究員 (30408075)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2020年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
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| キーワード | 液液相分離 / 核内RNA顆粒 / がん / プロテオミクス / 核内構造体 / 液-液相分離 / ncRNA / RNA結合タンパク質 / 近接依存性標識法 / ガン細胞 / 質量分析 / ダイセクション / 相分離 / レーザーマイクロダイセクション |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究ではガン細胞で形成される核内RNA顆粒の新規構成因子やRNAを同定し、構造体形成における役割を明らかにすることで、ガン細胞における核内RNA顆粒の生理機構の解明をおこなう。核内RNA顆粒を含む細胞内凝集体の解析においては、溶解により凝集体が崩壊する場合や夾雑物の混入が生じてくるため凝集体の真の情報が得られないことがある。
本研究では、①構造体が不溶性核画分に存在する性質を利用した構造体の精製・濃縮および②改良型レーザーマイクロダイセクションシステムを利用した構造体の回収をおこなうことにより問題点を解決する。
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| 研究成果の概要 |
我々は、RNase感受性を示すDBC1核内構造体の新規構成因子の探索のため免疫沈降-MS解析をおこない、HNRNPLとHNRNPKを同定した。また、DNB構成因子のsiRNAにより、DBC1とHNRNPLがDNBの形成に必須であることを明らかにした。さらにHNRNPLがDNBの形成にどのように関与しているのか解析した結果、HNRNPLのRNA結合ドメインと天然変性領域が細胞内でのDNB形成とin vitroでの液滴形成に関与していることが明らかになった。このことから、DNB形成にはHNRNPLとRNAやタンパク質との多価相互作用による相分離の誘導が必要であることが示唆された。
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| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
近年、膜を持たない細胞内構造体が液-液相分離という現象よって形成されていることが明らかになってきた。最近では、この現象がクロマチン形成や転写活性化機構に関与すること、さらには天然変性領域のアミノ酸変異による相分離異常が神経変性疾患と関連していることも明らかになってきている。本研究では、膜を持たない細胞内構造体の中でも、がん細胞でRNAを骨格に形成される2つの核内構造体Sam68 nuclear body (SNB)とDBC1 nuclear body (DNB)の構成因子や骨格となるRNAの同定をおこない、構造体の形成機構を明らかにした。
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