研究課題/領域番号 |
20K07411
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分49020:人体病理学関連
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研究機関 | 京都府立医科大学 |
研究代表者 |
宮川 文 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90432385)
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研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2021年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2023年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2021年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2020年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
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キーワード | 肝免疫反応 / STK17A / 毛細胆管 / S1P2受容体 |
研究開始時の研究の概要 |
移植後の肝臓の免疫反応は肝内の小葉間胆管上皮へのリンパ球浸潤、上皮の破壊・消失と定義されているが、類洞側から侵入した免疫細胞が肝細胞頂端側の胆管の破壊にどう結びつくのか不明である。我々はセリンスレオニンキナーゼSTK17Aが肝細胞の頂端側に局在し、肝移植後の慢性拒絶として小葉間胆管が消失する前に毛細胆管レベルでSTK17Aの消失があり、胆管の形態変化につながることを示した。本研究では、STK17Aがかかわると考えられる胆管形成のシグナル系と、胆汁酸ないし免疫細胞を介した肝細胞のS1P2受容体のシグナル伝達経路の相互関係に着目することで肝細胞における免疫反応と毛細胆管破壊との関係を明らかにする。
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研究実績の概要 |
我々はこれまでにSTK17Aが肝細胞の毛細胆管に局在することを初めて報告し、進行性に小葉間胆管の減少・消失をきたす病態である肝移植後の慢性拒絶反応をきたした患者肝生検において、その発現量が著しく低下し、肝移植後早期から毛細胆管の破壊が進行していることを示した。本課題では肝細胞におけるその局在と共局在蛋白の確認とともに、機能解析を進めている。HepG2細胞の通常培養では毛細胆管が明瞭に構築されないために、コラーゲンビトリゲル膜を用いた3次元培養系を導入し、STK17Aの強制発現やノックダウンを行い、毛細胆管形成能、胆汁排泄機能とSTK17Aの関与について解析した。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
3次元培養の導入により毛細胆管様の構築を形成させることができ、STK17Aの強制発現およびノックダウンによる形態変化の観察とともに、ウエスタンブロッティングにより蛋白レベルでの発現を解析しているが、発現量が少ないため他の手法を検討している。
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今後の研究の推進方策 |
ウエスタンブロッティングやELISAを用いて毛細胆管機能におけるSTK17Aの役割を解析していく。免疫沈降によりSTK17Aの結合パートナーの同定を試みることにより、STK17Aの機能に関連する蛋白質の同定、検証を行う予定である。
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