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芽胞形成菌に特異的に保存される新規プロテーゼYabGの機能・構造解析

研究課題

研究課題/領域番号 20K07490
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
審査区分 小区分49050:細菌学関連
研究機関摂南大学

研究代表者

山澤 龍治  摂南大学, 薬学部, 助教 (20624068)

研究分担者 桑名 利津子  摂南大学, 薬学部, 講師 (50330361)
研究期間 (年度) 2020-04-01 – 2025-03-31
研究課題ステータス 交付 (2023年度)
配分額 *注記
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
キーワードシステインプロテアーゼ / 芽胞 / zymogen / プロセッシング / プロテアーゼ / X線結晶構造解析
研究開始時の研究の概要

芽胞形成菌は栄養飢餓状態になると栄養細胞形態から芽胞へと形態変化する。加熱等の対応は行われているが、芽胞は耐熱性が高く、常在菌であることから食品混入は完全に防ぐことはできない。食品製造業会において、食の安全性・信頼性の面から芽胞への対処は強く望まれている。
YabG は2000年に芽胞形成に重要なタンパク質分解酵素であることが明らかにされたが、詳細な機能は未だに明らかになっていない。本研究課題は、YabGの詳細な機能を明らかにすることで、芽胞をターゲットとした抗菌薬、食品安定剤の開発に繋げることを目的としている。

研究実績の概要

枯草菌YabGの組換え体YabGは芽胞形成菌に存在する34 kDaのタンパク質をコードする遺伝子で、芽胞殻に含まれる芽胞形成タンパク質をプロセシングするプロテアーゼであることが報告されている。既存のプロテアーゼとの相同性は低くMEROPSデータベースの分類はfamily U57(unknown catalytic type)で、触媒機構等は不明であった。
これまでに組換え体を用いてYabGがアルギニンのC末端側を加水分解するエンド型システインプロテアーゼであることを明らかにした。さらにSporopainがLys基質に対して活性が無い、Arg特異的であることを明らかにした。これはMEROPSデータベースに登録されている113種のシステインプロテアーゼのファミリーのいずれとも配列が一致しない、新規のシステインプロテアーゼであることを明らかにし、我々はYabGを「Sporopain」と命名した。Sporopainの活性中心付近の配列はClan CD に属する酵素群と配列が類似することから、Sporopain はClan CDに属すると考えられる。Sporopainは全長35 kDaで発現したあと、自己分解することで、一旦24-kDa 中間体になり、その後、数 kDa に自己分解する。35 kDa全長体から24 kDa中間体に自己分解する際には、5つの中間体があることがSDS-PAGEで確認できた。これらの中間体はN末シークエンス解析の結果より、YabGのN末端側のArg5、Arg17、Arg49、Arg93のC末端側が加水分解されていることを明らかにした(Yamazawa et al., 2021, Kuwana et al., 2022, Kuwana et al., 2023)。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

2021年度までの結果をJounal of biochemistryに掲載することができた(Yamazawa et al. J Biochem. 2022 Mar3;171(3):315-324.)。さらに、Clostridium属細菌、Geobacillus属細菌のsporopainのクローニング、組換えタンパク質の発現・精製・活性測定を行い、sporopainの基質特異性や、各細菌のsporopainの菌特異的機能を明らかにすることができた。現在、投稿論文を調整中である。

今後の研究の推進方策

これまでの研究で、SporopainがN末端領域をどの様に分解するかは明らかにしてきたが、その機能までは明らかにできていない。N末端の機能を明らかにするためにN末端領域によるSporopainのプロテアーゼ活性の影響を、組換え体を用いて検討して行く。また、申請書の研究実践計画にある様に結晶構造解析を進めて行く。

報告書

(4件)
  • 2023 実施状況報告書
  • 2022 実施状況報告書
  • 2021 実施状況報告書
  • 2020 実施状況報告書
  • 研究成果

    (50件)

すべて 2023 2022 2021 2020

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (46件) (うち国際学会 2件)

  • [雑誌論文] Excessive ultraviolet C irradiation causes spore protein denaturation and prohibits the initiation of spore germination in <i>Bacillus subtilis </i>2023

    • 著者名/発表者名
      KUWANA RITSUKO、YAMAZAWA RYUJI、ASADA RYOKO、ITO KIYOSHI、FURUTA MASAKAZU、TAKAMATSU HIROMU
    • 雑誌名

      Journal of Microorganism Control

      巻: 28 号: 1 ページ: 15-25

    • DOI

      10.4265/jmc.28.1_15

    • ISSN
      2758-6383, 2758-6391
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書 2022 実施状況報告書
  • [雑誌論文] The Study of Diversity in Sporulation among Closely Genetically Related <i>Bacillus cereus</i> Strains2022

    • 著者名/発表者名
      KUWANA RITSUKO、YAMAZAWA RYUJI、ITO KIYOSHI、TAKAMATSU HIROMU
    • 雑誌名

      Biocontrol Science

      巻: 27 号: 3 ページ: 143-151

    • DOI

      10.4265/bio.27.143

    • ISSN
      1342-4815, 1884-0205
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [雑誌論文] Comparative analysis of thioflavin T and other fluorescent dyes for fluorescent staining of<i>Bacillus subtilis</i>vegetative cell, sporulating cell, and mature spore2022

    • 著者名/発表者名
      Kuwana Ritsuko、Yamazawa Ryuji、Ito Kiyoshi、Takamatsu Hiromu
    • 雑誌名

      Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry

      巻: 87 号: 3 ページ: 338-348

    • DOI

      10.1093/bbb/zbac195

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [雑誌論文] Identification of the active site and characterization of a novel sporulation-specific cysteine protease YabG from <i>Bacillus subtilis</i>2021

    • 著者名/発表者名
      Yamazawa Ryuji、Kuwana Ritsuko、Takeuchi Kenji、Takamatsu Hiromu、Nakajima Yoshitaka、Ito Kiyoshi
    • 雑誌名

      The Journal of Biochemistry

      巻: 171 号: 3 ページ: 315-324

    • DOI

      10.1093/jb/mvab135

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] Geobacillus stearothermophilus YabGプロテアーゼの四次構造に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      中川 雪乃1、山澤 龍治1、桑名 利津子1、高松 宏治1、伊藤 潔1
    • 学会等名
      日本薬学会第144年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] C. sporogenes NBRC14293におけるyabG遺伝子の機能解析2023

    • 著者名/発表者名
      小南 涼雅1、中川 雪乃1、山澤 龍治1、桑名 利津子1、伊藤 潔1、高松 宏治1
    • 学会等名
      日本薬学会第144年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] バチラス属細菌の細胞構造に対するフェネチルアルコールの効果に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      大嶋 桃果1、小田 祐介1、小川 優希奈1、浅川 恵梨1、山澤 龍治1、桑名 利津子1、伊藤 潔1、 高松 宏治1
    • 学会等名
      日本薬学会第144年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 黄色ブドウ球菌の細胞構造に対するフェネチルアルコールの効果に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      小田 祐介1、大嶋 桃果1、小川 優希奈1、浅川 恵梨1、山澤 龍治1、桑名 利津子1、伊藤 潔1、 高松 宏治1
    • 学会等名
      日本薬学会第144年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] フェネチルアルコール存在下における黄色ブドウ球菌の抗生物質感受性に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      浅川 恵梨1、小田 祐介1、小川 優希奈1、大嶋 桃果1、山澤 龍治1、桑名 利津子1、伊藤 潔1、 高松 宏治1
    • 学会等名
      日本薬学会第144年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 黄色ブドウ球菌のライブセルイメージングに用いる多重染色法に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      小川 優希奈1、小田 祐介1、大嶋 桃果1、浅川 恵梨1、山澤 龍治1、桑名 利津子1、伊藤 潔1、 高松 宏治1
    • 学会等名
      日本薬学会第144年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] システインプロテアーゼYabGのN末端領域は自身のプロテアーゼ活性を阻害する2023

    • 著者名/発表者名
      山澤 龍治1、桑名 利津子1、中嶋 義隆2、高松 宏治1、伊藤 潔1
    • 学会等名
      日本薬学会第144年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] Comparative Analysis of Thioflavin T and other Fluorescent Dyes for Fluorescent Staining of Bacillus subtilis Vegetative Cell, Sporulating Cell, and Mature Spore.2023

    • 著者名/発表者名
      Ritsuko Kuwana, Ryuji Yamazawa, Kiyoshi Ito, and Hiromu Takamatsu
    • 学会等名
      The BACELL meeting 2023
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] YabG is a novel arginine-specific cysteine protease.2023

    • 著者名/発表者名
      Ryuji Yamazawa, Ritsuko Kuwana, Hiromu Takamatsu and Kiyoshi Ito
    • 学会等名
      The BACELL meeting 2023
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] 枯草菌YabGの基質 CotFの精製と結晶化条件の検討2023

    • 著者名/発表者名
      小高智哉 1、山澤龍治 1、桑名利津子 1、中嶋義隆 2、竹内健治 1、高松宏治 1、伊藤 潔
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] YabGプロテアーゼのN末端領域は活性を阻害する2023

    • 著者名/発表者名
      中村 諒 1、山澤龍治 1、桑名利津子 1、中嶋義隆 2、竹内健治 1、高松宏治 1、伊藤 潔 1
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 枯草菌YabGに保存されたアルギニン残基の役割2023

    • 著者名/発表者名
      奥島香音 1、山澤龍治 1、桑名利津子 1、中嶋義隆 2、竹内健治 1、高松宏治 1、伊藤 潔 1
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 結晶構造解析を目指した好熱菌 Geobacillus stearothermophilus YabG の精製と結晶化2023

    • 著者名/発表者名
      高橋沙耶香 1、山澤龍治 1、桑名利津子 1、中嶋義隆 2、竹内 健治 1、高松宏治 1、伊藤 潔 1
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] Clostridium butyricumの形態観察を目的とした染色技術の開発研究2023

    • 著者名/発表者名
      爪 恵音、松尾小夏、山澤龍治、桑名利津子、伊藤 潔、高松宏治
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] プロバイオティクス製剤のClostridium butyricumの芽胞形成およびpH変化による酪酸生産時期の解析2023

    • 著者名/発表者名
      松尾小夏、爪 恵音、山澤龍治、伊藤 潔、高松宏治、桑名利津子
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 2xSG培地における培養温度の違いによるセレウス菌の芽胞形成の多様性解析2023

    • 著者名/発表者名
      吉原麻佑子、山澤龍治、伊藤 潔、高松宏治、桑名利津子
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 紫外線照射後の発芽に関与する ykoV-ligD 遺伝子の解析2023

    • 著者名/発表者名
      篠原愛美、山澤龍治、伊藤 潔、高松宏治、桑名利津子
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 生菌製剤に含まれる枯草菌芽胞に由来する酵素の医薬品に対する影響に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      大内多恵、山澤龍治、桑名利津子、伊藤 潔、高松宏治
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 緑色蛍光タンパク質を用いた枯草菌膜タンパク質の局在部位の解析2023

    • 著者名/発表者名
      黒木宏紀、山澤龍治、桑名利津子、伊藤 潔、高松宏治
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 蛍光タンパク質と蛍光色素を用いた細胞膜を標的とする抗生物質の作用の可視化に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      福本紗也、山澤龍治、桑名利津子、伊藤 潔、高松宏治
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 芽胞形成菌間におけるSpoIVAタンパク質およびYabGタンパク質の機能の補完性の解析2023

    • 著者名/発表者名
      松岡志保、山澤龍治、伊藤 潔、高松宏治、桑名利津子
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱菌Geobacillus stearothermophilus SpoIVAのポリマー化に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      大東祐香子 1、山澤龍治 1、桑名利津子 1、中嶋義隆 2、竹内 健治 1、高松宏治 1、伊藤 潔 1
    • 学会等名
      第73回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] 過剰量の紫外線照射による枯草菌芽胞タンパク質の変性と発芽抑制2023

    • 著者名/発表者名
      桑名利津子1、山澤龍治1、朝田良子2、伊藤 潔1、古田雅一2、高松宏治1
    • 学会等名
      日本防菌防黴学会第50回年次大会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] Geobacillus stearothermophilus由来YabGプロテアーゼの機能解析2023

    • 著者名/発表者名
      山澤龍治、桑名利津子、竹内健治、中嶋義隆、高松宏治、伊藤潔
    • 学会等名
      日本薬学会第143年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 環境変化によるBacillus cereusの芽胞形成の多様性に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      桑名利津子、山澤龍治、伊藤潔、高松宏治
    • 学会等名
      日本薬学会第143年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Bacillus cereusの近縁株間における芽胞形成の多様性に関する研究2022

    • 著者名/発表者名
      桑名利津子、山澤龍治、伊藤潔、高松宏治
    • 学会等名
      日本防菌防黴学会第49回年次大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Clostridium sporogenes NBRC 14293 spoIVA遺伝子の機能解析2022

    • 著者名/発表者名
      水落達也、山澤龍治、伊藤潔、高松宏治、桑名利津子
    • 学会等名
      第72回 日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 好熱菌の芽胞形成期特異的プロテアーゼYabGの酵素化学的諸性質の検討2022

    • 著者名/発表者名
      吉川幸佑、山澤龍治、桑名利津子、竹内健治、高松宏治、中嶋義隆、伊藤潔
    • 学会等名
      第72回 日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 生菌剤の品質評価に関する研究2022

    • 著者名/発表者名
      岡田悠暉、山澤龍治、桑名利津子、伊藤潔、高松宏治
    • 学会等名
      第72回 日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 枯草菌芽胞に対する過酢酸の効果についての研究2022

    • 著者名/発表者名
      森田翼、山澤龍治、伊藤潔、高松宏治、桑名利津子
    • 学会等名
      第72回 日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 紫外線照射芽胞の殺菌評価方法の開発2022

    • 著者名/発表者名
      東藤翔雲、伊藤潔、山澤龍治、高松宏治、桑名利津子
    • 学会等名
      第72回 日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 芽胞形成期特異的プロテアーゼYabGの触媒作用に重要なグルタミン酸残基の役割2022

    • 著者名/発表者名
      福宮海斗、山澤龍治、桑名利津子、竹内健治、高松宏治、中嶋義隆、伊藤潔
    • 学会等名
      第72回 日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] プロテアーゼ阻害剤シード化合物となるフッ素化ジペプチドの酵素的速度論的分割とその活性2022

    • 著者名/発表者名
      宮里 悠矢、樽井 敦、軽尾 友紀子、佐藤 和之、河合 健太郎、山澤 龍治、伊藤 潔、 表 雅章
    • 学会等名
      第72回 日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 歯周病菌産生酵素活性測定用プローブ合成と活性評価2022

    • 著者名/発表者名
      軽尾 友紀子、東野 崇太、樽井 敦、佐藤 和之、山澤 龍治、伊藤 潔、河合 健太郎、 表 雅章
    • 学会等名
      第72回 日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 新規トリプシン様システインプロテアーゼ YabG (sporopain) の基質認識に重要なグルタミン酸残基の同定2022

    • 著者名/発表者名
      山澤龍治、桑名利津子、竹内健治、中嶋義隆、高松宏治、伊藤潔
    • 学会等名
      第95回日本生化学会大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Bacillus subtilis 由来芽胞形成期特異的プロテアーゼ YabG の機能解析2021

    • 著者名/発表者名
      三宅航平、山澤龍治、竹内健治、桑名利津子、高松宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第71回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 枯草菌由来芽胞形成期特異的プロテアーゼ YabG の N 末端領域の機能解析2021

    • 著者名/発表者名
      藤原寿光、山澤龍治、竹内健治、桑名利津子、高松宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第71回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 芽胞形成期特異的プロテアーゼ YabG の触媒機構に関与する残基の検討2021

    • 著者名/発表者名
      丹波雄介、山澤龍治、竹内健治、桑名利津子、高松宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第71回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] Clostridium 属における芽胞形成期特異的プロテアーゼ YabG の機能解析2021

    • 著者名/発表者名
      北村穂香、山澤龍治、竹内健治、桑名利津子、高松宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第71回日本薬学会関西支部総会・大会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 新規トリプシン様システインプロテアーゼ YabG (sporopain) の基質認識に重要なグルタミン酸残基の同定2021

    • 著者名/発表者名
      山澤 龍治、桑名 利津子、竹内 健治、高松 宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      日本薬学会第142年会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 新規システインプロテアーゼ枯草菌YabGの機能解析2021

    • 著者名/発表者名
      山澤 龍治、桑名 利津子、竹内 健治、高松 宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第94回日本生化学会大会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] Clostridium属における芽胞形成期特異的プロテアーゼYabGの機能解析2021

    • 著者名/発表者名
      山澤 龍治、桑名 利津子、竹内 健治、高松 宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      日本薬学会第141年会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] 枯草菌YabGプロテアーゼは自己消化を触媒する2020

    • 著者名/発表者名
      山澤 龍治、桑名 利津子、竹内 健治、高松 宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第70回日本薬学会関西支部大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] 自己分解する芽胞形成期特異的プロテアーゼYabGの安定条件の検討2020

    • 著者名/発表者名
      藤原 寿光、山澤 龍治、桑名 利津子、竹内 健治、高松 宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第70回日本薬学会関西支部大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] Clostridium属における芽胞形成期特異的プロテアーゼYabGの機能解析2020

    • 著者名/発表者名
      北村 穂香、山澤 龍治、桑名 利津子、竹内 健治、高松 宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第70回日本薬学会関西支部大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] 新規システインプロテアーゼ枯草菌YabGの機能解析2020

    • 著者名/発表者名
      山澤 龍治、桑名 利津子、竹内 健治、高松 宏治、伊藤 潔
    • 学会等名
      第93回日本生化学会大会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書

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公開日: 2020-04-28   更新日: 2024-12-25  

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