microRNAを用いた新規の肝線維化診断法の確立と肝線維化治療法の開発

• 研究課題/領域番号: 20K08314
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 審査区分: 小区分53010:消化器内科学関連
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 松浦 健太郎 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 講師 (30580576)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2025-03-31
• 研究課題ステータス: 交付 (2023年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2020年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
• キーワード: miRNA / 細胞外小胞 / 肝線維化 / 核酸創薬

研究開始時の研究の概要

miRNAは、肝疾患における炎症、線維化、発癌機構に深く関与しており、疾患バイオマーカー、創薬の標的として期待されている。申請者はこれまでの研究から、末梢血中のmiRNA発現レベルは肝線維化進展度のバイオマーカーとなる可能性を見出している。本研究では、新規の細胞外小胞（Extracellular vesicles: EVs ）精製技術を用い、血清EVs中のmiRNA発現解析を行い、新規の肝線維化バイオマーカーの確立を目指す。さらに、同定したmiRNAの肝線維化進展および線維化改善に与える影響について機能解析し、新規の核酸創薬：肝線維化改善薬を開発する。

研究実績の概要

申請者はこれまでの研究から、末梢血中のmiRNA発現レベルは肝線維化進展度のバイオマーカーとなる可能性を見出している。本研究では、新規の細胞外小胞（Extracellular vesicles: EVs）精製技術を用い、C型肝炎ウイルス（HCV）排除後の肝線維化改善過程における検体を用いて、血清EVs中のmiRNA発現解析を行い、新規の肝線維化バイオマーカーの確立を目指す。さらに、同定したmiRNAの肝線維化進展および線維化改善に与える影響について機能解析し、新規の核酸創薬：肝線維化改善薬を開発する。
治療によりHCV排除が得られた肝硬変患者の血清から新規のEVs精製技術である多孔質ガラスを用いたスピンカラムを用いて効率的に血清中のEVsを回収し、経時的に肝線維化・予備能の改善した患者群と、改善しない群におけるEVs中のmiRNA解析をマイクロアレイおよびRNA-seqを用いて網羅的に行い、肝線維化・予備能の改善に関連する候補miRNAを同定した。その後、候補miRNAについて別検体を用いてqPCRで再現性を検証した結果、一つのmiRNAにおいて再現された。本miRNAはこれまでの細胞・動物実験レベルで肝線維化に関与していることが報告されており、ヒトの血清EVs中の発現レベルがHCV排除後の肝線維化・予備能の改善に関連することを明らかにしたことは非常に興味深く、現在欧文誌に投稿中である。
また、治療によりHCVの排除された肝硬変患者の保存血清を用いて、その後の肝線維化・予備能の改善・悪化に関連するケモカイン/サイトカインの解析を進め、Angiopoietin-2、CXCL10が有意なケモカインとして同定され、欧文誌に2報発表した。また、血清Angiopoietin-2レベルが、HCV排除後の肝発癌に関連することも明らかにし欧文誌に発表した。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

血清由来の細胞外小胞中のmiRNA発現解析における適切な方法を確立するために時間を要した。また、追加の臨床検体を得るために時間を要したため。

今後の研究の推進方策

現在投稿中のHCV排除後の肝線維化・予備能改善に関連する血清EVs中のmiRNAについての論文を完結する。

研究成果

• [雑誌論文] Serum Angiopoietin-2 Levels Predict the Development of Hepatocellular Carcinoma following Hepatitis C Virus Eradication Using Direct-Acting Antiviral Agents (2024)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Takanori、Matsuura Kentaro、Nagura Yoshihito、Kawamura Hayato、Fujiwara Kei、Ogawa Shintaro、Nagaoka Katsuya、Iio Etsuko、Watanabe Takehisa、Kataoka Hiromi、Tanaka Yasuhito
  • 雑誌名: Oncology 巻: - 号: 7 ページ: 1-10
  • DOI: 10.1159/000536154
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum inducible protein 10?kDa/C‐X‐C motif chemokine?10 levels predict regression of M2BPGi‐based liver fibrosis after hepatitis?C virus eradication by direct‐acting antiviral agents (2023)
  • 著者名/発表者名: Nagura Yoshihito、Suzuki Takanori、Matsuura Kentaro、Ogawa Shintaro、Kawamura Hayato、Kuno Kayoko、Fujiwara Kei、Nojiri Shunsuke、Nagaoka Katsuya、Iio Etsuko、Watanabe Takehisa、Kataoka Hiromi、Tanaka Yasuhito
  • 雑誌名: Hepatology Research 巻: 54 号: 1 ページ: 32-42
  • DOI: 10.1111/hepr.13962
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum angiopoietin‐2 levels predict regression of Mac‐2 binding protein glycosylation isomer‐based liver fibrosis after hepatitis C virus eradication by direct‐acting antiviral agents (2022)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Takanori、Matsuura Kentaro、Nagura Yoshihito、Ogawa Shintaro、Fujiwara Kei、Nojiri Shunsuke、Watanabe Takehisa、Kataoka Hiromi、Tanaka Yasuhito
  • 雑誌名: Hepatology Research 巻: 52 号: 11 ページ: 919-927
  • DOI: 10.1111/hepr.13823
  • 査読あり
• [雑誌論文] International multicenter validation of GES score for HCC risk stratification in chronic hepatitis C patients (2022)
  • 著者名/発表者名: Shiha Gamal、Soliman Reham、Mikhail Nabiel N. H.、Carrat Fabrice、Azzi Jessica、Nathalie Ganne‐Carrie、Toyoda Hidenori、Uojima Haruki、Nozaki Akito、Takaguchi Koichi、Hiraoka Atsushi、Atsukawa Masanori、Abe Hiroshi、Matsuura Kentaro、 et al.
  • 雑誌名: Journal of Viral Hepatitis 巻: 29 号: 9 ページ: 807-816
  • DOI: 10.1111/jvh.13717
  • 査読あり
• [雑誌論文] Liver-related events after direct-acting antiviral therapy in patients with hepatitis C virus-associated cirrhosis (2022)
  • 著者名/発表者名: Tahata Y, Hikita H, Mochida S, Enomoto N, Kawada N, Kurosaki M, Ido A, Miki D, Yoshiji H, Takikawa Y, Sakamori R, Hiasa Y, Nakao K, Kato N, Ueno Y, Yatsuhashi H, Itoh Y, Tateishi R, Suda G, Takami T, Nakamoto Y, Asahina Y, et al.
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology 巻: 57 号: 2 ページ: 120-132
  • DOI: 10.1007/s00535-021-01845-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characteristics and Prognosis of De Novo Hepatocellular Carcinoma After Sustained Virologic Response (2021)
  • 著者名/発表者名: Toyoda Hidenori、Watanabe Tsunamasa、Tanaka Junko
  • 雑誌名: Hepatology Communications 巻: 5 号: 7 ページ: 1290-1299
  • DOI: 10.1002/hep4.1716
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A novel noninvasive formula for predicting cirrhosis in patients with chronic hepatitis C (2021)
  • 著者名/発表者名: Atsukawa M, Tsubota A, Kondo C, Uchida-Kobayashi S, Takaguchi K, Tsutsui A, Nozaki A, Chuma M, Hidaka I, Ishikawa T, Iwasa M, Tamai Y, Tobari M, Matsuura K, Nagura Y, Abe H, Kato K, Suzuki K, Okubo T, Arai T, Itokawa N, Toyoda H, Enomoto M, Tamori A, Tanaka Y, Kawada N, Takei Y, Iwakiri K.
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 16 号: 9 ページ: e0257166-e0257166
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0257166
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Time‐course changes in liver functional reserve after successful sofosbuvir/velpatasvir treatment in patients with decompensated cirrhosis (2021)
  • 著者名/発表者名: Atsukawa Masanori、Watanabe Tsunamasa、Iwakiri Katsuhiko
  • 雑誌名: Hepatology Research 巻: 52 号: 3 ページ: 235-246
  • DOI: 10.1111/hepr.13739
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical efficacy of a novel, high-sensitivity HBcrAg assay in the management of chronic hepatitis B and HBV reactivation (2021)
  • 著者名/発表者名: Inoue Takako、Kusumoto Shigeru、Iio Etsuko、Ogawa Shintaro、Suzuki Takanori、Yagi Shintaro、Kaneko Atsushi、Matsuura Kentaro、Aoyagi Katsumi、Tanaka Yasuhito
  • 雑誌名: Journal of Hepatology 巻: in press 号: 2 ページ: 302-310
  • DOI: 10.1016/j.jhep.2021.02.017
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibitory Effect of a Human MicroRNA, miR-6133-5p, on the Fibrotic Activity of Hepatic Stellate Cells in Culture (2020)
  • 著者名/発表者名: Hamada-Tsutsumi Susumu、Onishi Masaya、Matsuura Kentaro、Isogawa Masanori、Kawashima Keigo、Sato Yusuke、Tanaka Yasuhito
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 21 号: 19 ページ: 7251-7251
  • DOI: 10.3390/ijms21197251
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Sofosbuvir plus velpatasvir treatment for hepatitis C virus in patients with decompensated cirrhosis: a Japanese real-world multicenter study (2020)
  • 著者名/発表者名: Tahata Yuki、Hikita Hayato、Matsuura Kentaro、Takehara Tetsuo, et al.
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology 巻: 56 号: 1 ページ: 67-77
  • DOI: 10.1007/s00535-020-01733-4
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] DAA治療後の血清CXCL10高値はSVR後の肝線維化非改善に関連する (2023)
  • 著者名/発表者名: 松浦健太郎，名倉義人，田中靖人
  • 学会等名: 第59回日本肝臓学会総会
• [学会発表] HCV排除後の肝硬変患者における血清サイトカイン/ケモカイン発現解析 (2021)
  • 著者名/発表者名: 名倉義人、松浦健太郎、鈴木孝典、藤原圭、野尻俊輔、田中靖人
  • 学会等名: 第57回日本肝臓学会総会
• [学会発表] B型慢性肝疾患に対する核酸アナログ投与中および中止後の肝発癌に関する検討 (2020)
  • 著者名/発表者名: 松浦健太郎，飯尾悦子，田中靖人
  • 学会等名: 第106回日本消化器病学会総会
• [学会発表] C型慢性肝疾患におけるDAA治療後の肝予備能・予後に関連する因子 (2020)
  • 著者名/発表者名: 飯尾悦子、松浦健太郎、田中靖人
  • 学会等名: 第106回日本消化器病学会総会
• [学会発表] C型肝硬変患者におけるDAA治療後発癌と生命予後の検討～未治療群と比較して (2020)
  • 著者名/発表者名: 飯尾悦子、松浦健太郎、島田紀朋、田中靖人
  • 学会等名: 第56回日本肝臓学会総会