| 研究課題/領域番号 |
20K08830
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分54030:感染症内科学関連
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| 研究機関 | 愛知医科大学 |
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研究代表者 |
小松 孝行 愛知医科大学, 医学部, 教授 (20215388)
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| 研究分担者 |
田中 幸枝 福井大学, 学術研究院医学系部門, 助教 (10197486)
森田 奈央子 愛知医科大学, 医学部, 助教 (20815881)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
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| キーワード | インフラマソーム / パラミクソウイルス / ニューモウイルス / アクセサリー蛋白質 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
パラインフルエンザウイルス(PIV)の重症呼吸器感染症，ニパウイルスの致死的新興感染症など，幅広いパラミクソウイルス(PMV)の予防・治療法が望まれている．私は，アクセサリー蛋白質Vに，インフラマソーム抑制能(抗FM能)が保存されていることを明らかにした．V欠損ウイルス[V(-)]は弱毒化するため，V蛋白質やそれが関わる宿主因子は予防・治療法の標的となる．しかし，現在のV(-)は抗FM能以外の機能まで喪失するため，その役割の解明は難しい．本研究では，先ずⅠ型PIVを用いて全容を解明し，その情報をもとに，抗FM能のみを欠失した組換えPMVをデザインし，FM能が予防・治療法の標的となるか検討する．
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| 研究実績の概要 |
インフラマソームは，自然免疫細胞を中心に発現する細胞質多タンパク質複合体で，感染に伴う危険シグナルに察知して活性化しIL-1βやIL-18を分泌させ抗ウイルス免疫を誘導する．そのため，ウイルスはインフラマソームの活性化を抑制する方が増殖に有利である．私達はこれまでに，インフラマソームの再構成実験を用いて，「パラミクソウイルスのアクセサリー蛋白質に，インフラマソームの活性化を抑制する能力（抗インフラマソーム 能）が保存されている」ことを明らかにした．アクセサリー蛋白質を発現しない組換えウイルスは弱毒化する．そのため，アクセサリー蛋白質やそれが関わる宿主因子はワクチンや治療薬の標的となる．しかし，現在のアクセサリー蛋白質欠損パラミクソウイルスは抗インフラマソーム能以外の重要な機能（抗インターフェロン能や増殖調節能）まで喪失しているため，抗インフラマソーム能の役割を解明することは難しい．本研究では，パラミクソウイルスとニューモウイルスを用いて，抗インフラマソーム能のみを欠失した変異組換えウイルスを作出し，ウイルスの病原性における抗インフラマソーム能の役割，抗ウイルス免疫におけるインフラマソームの重要性を明らかにすることを目的とした．これまでに，上記ウイルスのアクセサリー蛋白質に変異を施し，抗インフラマソーム能のみを欠失した変異アクセサリー蛋白質をコードするウイルス遺伝子cDNAを作製した．さらに，作製したcDNAを用いて目的のウイルスを回収した．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
最初にデザインした変異では，目的の変異アクセサリー蛋白質をコードするウイルス遺伝子cDNAが得られなかったため，組換えウイルスの作製に取りかかるまでに時間を要した．これまでの経過は，2020-2021年度に，ウイルスのアクセサリー蛋白質の欠失変異体，点置換変異体をコードするcDNAを作製した．再構成実験を用いて，抗インフラマソーム能に加えて抗インターフェロン能，ウイルスの増殖調節能を評価したところ，抗インターフェロン能，ウイルスの増殖調節能に変化はなく，抗インフラマソーム能のみを欠失した変異アクセサリー蛋白質をコードするcDNAを複数得ることができた．2022年度は，得られたcDNAを組み換えることによって抗インフラマソーム能のみを欠失した変異アクセサリー蛋白質を発現する組換えウイルスを回収した．それぞれの組換えウイルスについて，培養細胞を用いて抗インフラマソーム能，抗インターフェロン能，増殖について評価したところ，抗インフラマソーム能のみを欠失した組換えウイルスを作製することができた．
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| 今後の研究の推進方策 |
2023年度は，2022年度に作製した抗インフラマソーム能のみを欠失した変異アクセサリー蛋白質を発現する組換えウイルスを用いて，マウスでの増殖，病原性，抗体誘導能等を調べ，ワクチンとして有効かどうか検討する．
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