| 研究課題/領域番号 |
20K09445
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分56020:整形外科学関連
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| 研究機関 | 川崎医科大学 |
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研究代表者 |
原 綾英 川崎医科大学, 医学部, 准教授 (90509340)
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| 研究分担者 |
宮本 修 川崎医科大学, 医学部, 教授 (00253287)
刀袮 重信 東京電機大学, 理工学研究科, 特別専任教授 (70211399)
中村 丈洋 川崎医科大学, 医学部, 教授 (80419506)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2020年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | 脊髄損傷 / 造精機能障害 / 男性不妊症 / 脊椎損傷 / 無精子症 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
脊髄損傷患者の多くに造精機能障害が出現することが知られている。この造精機能障害がどのような機序で起こっているかは諸説あるものの解明されてはいない。したがって、現状では、脊髄損傷患者の造精機能の温存・回復に効果のある薬剤はない。本研究では、脊髄損傷患者における造精機能障害に対する治療 target となり得る蛋白を同定することを目的とする。これら candidates 蛋白が、脊髄損傷患者の精巣で発現しているか検証した後、これらの蛋白をtargetとした薬剤 (抑制剤 or 促進剤) を、rat 脊髄損傷モデルへ投与し、新規治療薬としての妥当性について造精機能を評価し検討する。
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| 研究実績の概要 |
8週齢のSprague-Dawleyラットの雄を用い、脊髄損傷モデルを作製し、造精機能障害モデルとしての妥当性を検証した後、2021年度までに行った時間経過によるタンパク発現の検討において、脊髄損傷後の早い段階で造精機能に通じる精巣内の変化が惹起されることが推測されたため、脊髄損傷モデル作製後 day 3 とsham手術群間についての解析を早急に行うこととした。これまでの2次元電気泳動において、脊髄損傷モデルでは、10kDa付近のスポットが増加し、濃く出現し、脊損損傷による精巣内の変化は、タンパク質の分解に起因している可能性が高いと予測していた。2021-22年度の2次元電気泳動では、脊髄損傷モデル群 (day3) とsham手術群との間に、10個の変化のある spot を検出した。しかし、質量分析を行ったが、タンパクの同定には至らなかった。検体の血液汚染による影響が考えられたため、2次元電気泳動を再試行した。血液汚染を可能な限り除去し、今回、脊髄損傷の有無によるスポットの差異はほぼ見られなかったが、新たに変化のある4個の spot を検出することができた。sham 手術群と比較し、脊椎損傷モデルで、濃く現れた spot 2個と薄く現れた spot 2個であり、再現性が確認できた。これらはいずれも10kDa 以下の低分子タンパクであった。タンパクを抽出し、質量分析法により、これらのタンパクを同定中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
2次元電気泳動によるタンパク解析で、再現性が得られなかった。血液によるコンタミネーションによると判明するまで、数カ月要した。
新型コロナ感染の社会情勢の中で、研究分担者と密な連携がとれなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
再現性のある二次元電気泳動の結果が得られているため、質量解析でタンパクが同定できれば、すみやかに、免疫染色、ヒト検体で検討可能である。研究分担者とともに、本研究への時間配分を増加させる予定である。
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