| 研究課題/領域番号 |
20K09717
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分56050:耳鼻咽喉科学関連
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| 研究機関 | 大分大学 |
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研究代表者 |
鈴木 正志 大分大学, 医学部, 教授 (60211314)
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| 研究分担者 |
平野 隆 大分大学, 医学部, 講師 (20305056)
川野 利明 大分大学, 医学部, 講師 (30633424)
門脇 嘉宣 大分大学, 医学部, 助教 (10706980)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2022年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
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| キーワード | PD-L1 / 免疫老化 / インフルエンザ菌 / 上気道 / 粘膜免疫 / PDL-1 / 上気道粘膜 / 免疫チェックポイント |
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| 研究開始時の研究の概要 |
経鼻免疫は上気道粘膜に効率的に免疫応答を誘導しうる方法であるが、個体における宿主免疫の多様性や脆弱性により免疫誘導の確実性が保証されにくい。インフルエンザ菌に対して、より確実な気道粘膜免疫誘導は重要な意義を持つものと思われる。目的を達成するために以下の事を行う。①インフルエンザ菌由来のワクチン抗原による気道粘膜免疫賦活化誘導。②抗CTLA-4抗体、抗PD-1/2抗体投与による粘膜免疫増強効果の解析。③インフルエンザ菌クリアランス解析による臨床応用への検討。より一定に増強された粘膜免疫応答が、ヒト気道感染の感染防御に関する新療法に貢献すると考える。
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| 研究実績の概要 |
BALB/cマウス（６週齢、６ヶ月齢、１年齢、１年６ヶ月齢を用いて検討を行った。各齢マウス（n＝5～１０）に、インフルエンザ菌由来外膜蛋白(OMP)を粘膜アジュバントのコレラトキシンとともに経鼻投与を週１回、計３回施行した。１年齢および１年６ヶ月齢マウスには抗PD-L1抗体投与群を作成し、同様に経鼻投与を週１回、計３回施行し、経鼻投与開始前１日前と経鼻投与後３日後に抗PD-L1抗体250μgを腹腔内投与している。各群から中耳洗浄液、鼻腔洗浄液、血清を採取し、ELISAによりOMP特異的抗体価について測定している。加齢に伴い、OMP特異的抗体価は減少し、６週齢マウスと比較して1年齢マウスでは中耳洗浄液中、および鼻腔洗浄液中のOMP特異的IgAおよびIgG抗体価の減少を認めたが、抗PDL-1抗体投与により、OMP特異的IgAおよびIgG抗体価の明らかな増加を認めた。1年６ヶ月齢マウスにおいては抗体価の増加傾向を認めたが、1年齢マウスほどの増加を認めなかった。抗PD-L1抗体投与により、中耳洗浄液、鼻腔洗浄液および血清中のOMP特異的抗体価の増加を認めた。加齢に伴う免疫応答の低下に対して、抗PD-L1抗体投与により粘膜免疫賦活化は可能と思われたが、年齢における制限は受ける可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
抗PD-L1抗体投与に伴う変化について、鼻粘膜組織、鼻粘膜関連リンパ組織(NALT)、肺、頚部リンパ節での解析を行っており、OMPによる粘膜免疫における応答において、抗PD-L1抗体投与による鼻腔洗浄液や血清中のOMP抗体価の粘膜免疫応答の賦活化を１年齢マウスで認めており、今回の実験結果で一定の成果は得られている。しかし、1年6ヶ月齢マウスにおいては、十分な上気道粘膜免疫賦活化が認められていない事が判明した。今後は1年6ヶ月齢マウスにおける粘膜免疫賦活化を阻害する要因や賦活化方法について新たに検討する。
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| 今後の研究の推進方策 |
BALB/cマウスを用いて、中耳粘膜、鼻粘膜組織（関連リンパ組織含む）、肺臓、頸部リンパ節、脾臓を採取し、上記組織において、コラゲネース処理や比重遠沈法などにより単核球を採取して、CD4、CD8陽性T細胞においてCD69、CD25、CD62L、CD44どの活性化マーカーにてTリンパ球の状態やPD-1の発現、および濾胞性ヘルパーT細胞についてCD279、CD185、B220陽性B細胞、CD11b陽性顆粒球、CD11c陽性樹状細胞などの活性化についても解析し、セルソーターを用いて各臓器よりT細胞分離後にRNAを抽出し、innate and adaptive immune responses PCR arrayを施行し、Tリンパ球のカスケードをRNAレベルから解析し、免疫応答でのカスケードの解明および細胞内シグナル伝達の解析を行い、抗PDL－１抗体投与後の免疫誘導の変化した因子について解明する。
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