| 研究課題/領域番号 |
20K10083
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分57050:補綴系歯学関連
|
|---|
| 研究機関 | 大阪歯科大学 |
|---|
研究代表者 |
川本 章代 大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (50368156)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2025-03-31
|
| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2021年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2020年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
|
|---|
| キーワード | エクソソーム / 歯肉溝滲出液 / miRNA |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
糖尿病関連歯周病患者の歯肉溝滲出液を採取し、エクソソーム内包miRNAを抽出し発現パターンを解析することで、歯周病と糖尿病とを併発する患者特有の発現挙動を把握し治療に結びつけることを目的とした。具体的には糖尿病患者ならびに健常者から歯肉溝滲出液を採取し、エクソソームの存在確認後、miRNA発現解析を行う。得られたデータと患者臨床情報を比較し、糖尿病関連歯周病特有のmiRNA発現パターンを探索する。
|
| 研究実績の概要 |
慢性歯周炎患者、ならびに慢性歯周炎と糖尿病を併発する患者の、上顎前歯を防湿後、歯肉溝にペリオペーパーを挿入し、染み出た浸出液を歯肉溝滲出液として採取した。血液の混入したペリオペーパーは取り除いた。慢性歯周炎は、歯周ポケット深さ、プロービング時の出血、歯の動揺度の測定から診断した。回収したペリオペーパーは、解析まで－８０度にて保存した。
解析には、ペリオペーパーを取り除き遠心後、Total Exosome Isolationを全液量の半分量入れ、SUPERaseInRNase Inhibitorを追加し、vortex後、１時間４度で静置、その後、遠心しエクソソームの抽出した。
エクソソームの存在を確認するために、ELISA、粒子径測定ならびにエクソソーム観察を実施した。すなわち、エクソソーム表面に存在しているCD9/CD63を検出するためサンドイッチELISA法を、ELSZ-2000を用いて粒子径100nm範囲のピークを観察した。また、transmission electron microscopeにてエクソソームを観察した。
RNAを 3D-Gene RNA extraction reagentを用いて抽出した。3D-Gene キットを用いて、網羅的にmiRNAの発現を解析した。
網羅的解析より、解析した全miRNA 2632個のうち、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者で発現が上昇したのは25個のmiRNA、減少したのは23個のmiRNAであった。今後、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者特有のmiRNA探索のため、糖尿病患者の血清miRNA関連論文を参考に、これらのmiRNAについて詳細な解析を行う予定である。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
新型コロナウイルス蔓延時期と重なり、対象となる被験者の診察控え、ならびに試料採取とコロナ検査が混同する可能性から、試料採取が遅延したため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
今後、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者特有のmiRNA探索のため、再度サンプルを採取し、網羅的解析によって得られたmiRNAについて詳細な解析を行う予定である。
|
