| 研究課題/領域番号 |
20K12183
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分63030:化学物質影響関連
|
|---|
| 研究機関 | 愛媛大学 |
|---|
研究代表者 |
仲山 慶 愛媛大学, 沿岸環境科学研究センター, 講師 (80380286)
|
|---|
| 研究分担者 |
北村 真一 愛媛大学, 沿岸環境科学研究センター, 准教授 (40448379)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
|
| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2021年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2020年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
|
|---|
| キーワード | 免疫毒性 / RNA-seq / コイ / サルモニシダ / エストロゲン / サルモニサイダ / 感染症 / Aeromonas salmonicida / 有害性評価 |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
免疫抑制作用を有する化学物質のスクリーニング法を開発し，評価すべき化学物質のランク付けを行う。また，コイにおけるサルモニサイダ症発症のマーカーを探索し，外観的症状の有無にかかわらず，発症の検出を可能とする。その上で，化学物質の暴露条件下での感染実験を行い，短期間の試験でマーカーの検出に基づく免疫抑制作用を評価する。短期試験で免疫毒性が検出された化合物については，発症率および死亡率を求める延長試験を実施し，短期試験の妥当性を評価する。以上の結果から，免疫毒性が現れる閾値を求め，致死毒性をはじめとした他の有害性の閾値と比較し，生態リスク評価における免疫毒性評価の必要性について議論する。
|
| 研究実績の概要 |
体重約5 gのコイにA. salmonicidaを浸漬感染し，1週間後に外観症状を確認した上で，頭腎，体腎，肝膵臓をそれぞれ採取した。感染区（n = 4）と対照区（n = 3）ともに雄から採取した各臓器をRNA-seqに供し，得られたシーケンス結果に基づいて遺伝子発現解析を実施した。また，体腎への影響を評価するために，体重約7 gのコイにA. salmonicidaを感染し，感染3日後および7日後に左右の体腎を摘出し，片方を病理組織学的観察に，もう片方をA. salmonicidaの検出に用いた。
発症した個体においては，頭腎が肥大し，体腎に重篤な損傷が視認できた。RNA-seqの結果，頭腎，体腎，肝膵臓の各臓器からそれぞれ51626，55471，38780の転写産物の発現が検出され，そのうち1241，965，1393の発現量が有意に変動していた。発現量が減少した遺伝子を対象に遺伝子オントロジー（GO）解析を行ったところ，鉄イオンの恒常性維持（GO:0055072）をはじめとした最も多くのGO termが体腎で検出された。体腎の病理組織学的観察から，造血組織の壊死および炎症性細胞の浸潤，尿細管上皮細胞の混濁や壊死など明確な病変が確認され，GO解析の結果と矛盾しなかった。また，感染個体の体腎にA. salmonicidaが存在することが疑われた。以上の結果から，A. salmonicidaはコイの体腎の機能低下させることが予想され，腎機能の評価により発症の確認が可能であることが示唆された。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
コロナウイルス感染症対策によって，研究の実施を妨げる要因が複数存在した上，国際会議等での発表機会を持つことができなかったため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
遺伝子発現解析の結果から，魚類の免疫系に深く関与する分子がA. salmonicida感染のマーカー候補として絞り込まれた。同マーカー候補分子の測定法の構築および感染個体におけるマーカー分子の応答を確認する。さらに，これまでの成果をまとめ，国際誌に投稿する。
|
