| 研究課題/領域番号 |
20K16983
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
荒生 祥尚 新潟大学, 医歯学総合病院, 特任准教授 (40870142)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
3,250千円 (直接経費: 2,500千円、間接経費: 750千円)
2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
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| キーワード | マイトファジー / ミトコンドリア / MASH / 脂肪肝 / ミトコンドリアDNAコピー数 / NAFLD / NASH / NAFL / MC4R-KOマウス |
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| 研究開始時の研究の概要 |
メタボリック症候群の増加に伴ってNAFLDが増加し、病態の解析と治療法の開発が課題である。活性酸素による酸化ストレスは原因の一つであり、その影響を受けやすいミトコンドリアDNA（mtDNA）コピー数の変化は、病態のマーカー、重症度などとの関連が示唆されるが、未だに明らかとなっていない。そこで、本研究では、種々のNASHのモデルマウスを用いて肝組織や全身の状態変化とmtDNAコピー数、ミトコンドリアの形態・機能や、ミトコンドリアの品質保持マイトファジーの経時的な変化を検証する。本研究により、NAFLDにおけるmtDNAの変化と病態への関与を明らかにし、マーカー治療対象としての有用性を検証する。
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| 研究実績の概要 |
マイトファジーレポーターマウス（OMP25-mCherry-GFPトランスジェニックマウス）の飼育を開始した。まずは通常食、メチオニンコリン欠乏食（MCD）、高脂肪食（HFD）を投与し、サンプルを回収した。マイトファジーレポーターマウスとC57B6Jマウスにおいて、特殊食餌投与によりモデルとして差がないかを肝組織で評価したが、脂肪や線維化の程度は、HFD、MCD各々でそれほど変化はなく、マイトファジーレポーターマウスでもMCDやHFDによる特殊食餌でもモデルとしては有効であることを確認した。マイトファジーレポーターマウスでは、心筋や骨格筋ではマイトファジーを示唆するmCherry単独の観察が比較的明瞭に観察されるが、肝臓においては自家蛍光の影響で、安定した観察が確立できていない状況である。クエンチング処理を行ったが、やはり自家蛍光は抑えられていない状況である。q-PCRによるマイトファジー関連遺伝子であるBNIP3, BNIP3Lを評価したところ、HFDとMCDでは発現が低下していた。ミトコンドリアの機能評価としてATP assayを行ったが、こちらもSCDと比較してHFDでは優位に低下、MCDでは統計学的に差は認めなかったが、低下傾向であった。蛍光顕微鏡による肝細胞のマイトファジーの評価は困難と判断し、ウエスタンブロッティング、免疫蛍光染色画像で、BNIP3など評価したが、有意な差は認めなかった。これ以上の研究継続は困難と判断し、研究を終了とした。
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