テノホビル(TDF)に対する新規耐性HBVの同定と耐性メカニズムの解明

• 研究課題/領域番号: 20K16996
• 研究種目: 若手研究
• 配分区分: 基金
• 審査区分: 小区分53010:消化器内科学関連
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 林 佐奈衣 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 特任助教 (10597587)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2022年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2021年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2020年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
• キーワード: B型肝炎ウイルス / 核酸アナログ / テノホビル / 変異 / 耐性 / genotype / 肝臓学 / 薬剤耐性

研究開始時の研究の概要

B型肝炎ウイルス(HBV)の推奨治療薬である核酸アナログはHBVのDNA複製を抑制するが、耐性HBV株の出現が問題視されている。研究代表者はテノホビル(TDF)抵抗性を示すB型慢性肝炎症例より新規変異を検出したが耐性メカニズムは明らかではない。本研究では、TDF不応例より新規TDF耐性株を同定し抗HBV薬に対する感受性を評価する。さらに既報および新規TDF耐性変異の重要性がHBV genotypeにより異なるかを解明する。
本研究よりTDF不応例のウイルス学的メカニズムが明らかになり現存治療薬の最適な選択が可能となる。またTDF耐性変異のgenotype依存性に対する情報が得られると期待される。

研究成果の概要

全国多施設病院で多剤不応を呈したB型慢性肝炎患者34例を対象にHBV遺伝子解析を行った結果、 LAM+ETV不応23例、LAM or ETV+ADV不応3例、ETV+TDF不応8例より既知変異保有25例中20例で新規RT変異を検出した。TDF/ETV併用中にVBTを起こした患者血清より新規RT変異およびETV耐性変異を有する新規HBV株を樹立し、in vitroにてTDF感受性試験を行った。その結果、新規HBV株はGenotype Ce野生株、ADV耐性1株およびETV耐性2株よりもTDF感受性の低下を呈した。一方で新規RT単独変異株のTDF感受性は野生株と比較して差は認められなかった。

研究成果の学術的意義や社会的意義

現在推奨される核酸アナログ(NAs)はいずれも強力にHBV複製を抑制するが、HBV根絶には至らないため、B型慢性肝炎の治療適応例の多くは多剤NAs治療を継続している。我々は、ETV/TDFに対して抵抗性を示すB型慢性肝炎症例より新規コンビネーションHBV株を同定し、TDF感受性の低下に寄与することを明らかにした。これまでにETV・TDFに対する交叉耐性変異の報告はないとされるが、推奨NAsであるETVおよびTDF/TAFに対する耐性変異を保有する慢性肝炎症例も散見されることから、今後もNAs治療により薬剤耐性変異株が出現する可能性は疑う余地がない。

研究成果

• [雑誌論文] Ivermectin Inhibits HBV Entry into the Nucleus by Suppressing KPNA2 (2022)
  • 著者名/発表者名: Anna Nakanishi, Hiroki Okumura, Tadahiro Hashita, Aya Yamashita, Yuka Nishimura, Chihiro Watanabe, Sakina Kamimura, Sanae Hayashi, Shuko Murakami, Kyoko Ito, Takahiro Iwao, Akari Ikeda, Tomoyasu Hirose, Toshiaki Sunazuka, Yasuhito Tanaka, Tamihide Matsunaga
  • 雑誌名: Viruses 巻: 14 ページ: 2468-2468
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Drug Discovery Study Aimed at a Functional Cure for HBV. (2022)
  • 著者名/発表者名: Takehisa Watanabe, Sanae Hayashi, Yasuhito Tanaka
  • 雑誌名: Viruses 巻: 14 ページ: 1393-1393
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Droplet digital PCR assay provides intrahepatic HBV?cccDNA quantification tool for clinical application (2022)
  • 著者名/発表者名: Hayashi Sanae、Isogawa Masanori、Kawashima Keigo、Ito Kyoko、Chuaypen Natthaya、Morine Yuji、Shimada Mitsuo、Higashi-Kuwata Nobuyo、Watanabe Takehisa、Tangkijvanich Pisit、Mitsuya Hiroaki、Tanaka Yasuhito
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 12 号: 1
  • DOI: 10.1038/s41598-022-05882-9
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Blood-Based Biomarkers in Hepatitis B Virus-Related Hepatocellular Carcinoma, Including the Viral Genome and Glycosylated Proteins (2021)
  • 著者名/発表者名: Hayashi Sanae、Nagaoka Katsuya、Tanaka Yasuhito
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 22 号: 20 ページ: 11051-11051
  • DOI: 10.3390/ijms222011051
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of a novel long-acting 4’-modified nucleoside reverse transcriptase inhibitor against HBV (2020)
  • 著者名/発表者名: Higashi-Kuwata Nobuyo、Hayashi Sanae、Kumamoto Hiroki、Ogata-Aoki Hiromi、Das Debananda、Venzon David、Hattori Shin-ichiro、Bulut Haydar、Hashimoto Mai、Otagiri Masaki、Takamune Nobutoki、Kishimoto Naoki、Davis David A.、Misumi Shogo、Kakuni Masakazu、Tanaka Yasuhito、Mitsuya Hiroaki
  • 雑誌名: Journal of Hepatology 巻: 15 号: 5 ページ: 33843-5
  • DOI: 10.1016/j.jhep.2020.12.006
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] ddPCR法を用いたcccDNA定量法の開発と臨床応用 (2022)
  • 著者名/発表者名: 林 佐奈衣 ,渡邊 丈久 ,田中 靖人
  • 学会等名: the japan society of hepatology
• [学会発表] Clinical Utility of Droplet Digital PCR for HBV cccDNA quantification (2022)
  • 著者名/発表者名: Sanae Hayashi, Yuji Morine, Mitsuo Shimada, Takehisa Watanabe, Yasuhito Tanaka
  • 学会等名: APASL Oncology 2022
  • 国際学会
• [学会発表] 核酸アナログ多剤耐性例のウイルス学的特徴 (2022)
  • 著者名/発表者名: 林佐奈衣、榎本大、松浦健太郎、井出達也、松居 剛志、髭修平、榎本平之、渡邊丈久、長岡克弥、立山雅邦、田中靖人
  • 学会等名: JDDW
• [学会発表] A novel droplet digital PCR reveals the stability of intrahepatic hepatitis B virus cccDNA and its clinical application (2021)
  • 著者名/発表者名: Sanae Hayashi, Masanori Isogawa, Keigo Kawashima, Kyoko Ito, Natthaya Chuaypen, Nobuyo Higashi-Kuwata, Pisit Tangkijvanich, Hiroaki Mitsuya, Yasuhito Tanaka
  • 学会等名: The Liver Meeting AASLD 2021
  • 国際学会
• [学会発表] In vivoで強力な抗HBV活性を発揮する長時間作用型新規核酸アナログE-CFCPの開発 (2021)
  • 著者名/発表者名: 林 佐奈衣,田中 靖人,満屋 裕明
  • 学会等名: The Japan Society of Hepatology
• [学会発表] 新規cccDNA絶対定量系の開発とその臨床応用 (2020)
  • 著者名/発表者名: Sanae Hayashi,Tangkijvanich Pisit,Yasuhito Tanaka
  • 学会等名: 第56回日本肝臓学会総会