| 研究課題/領域番号 |
20K17042
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
姫野 美沙緒 東京大学, 大学院医学系研究科(医学部), 助教 (80706416)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2021年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2020年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
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| キーワード | B型肝炎ウイルス / レポーターウイルス / 肝硬変 / 抗ウイルス薬 / レポーター / 抗HBV薬 / B型肝炎ウイルス(HBV) / 抗HBV薬スクリーニング / 肝非実質細胞 / iPS細胞 / 三次元培養 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
B型肝炎ウイルス(HBV)感染症は治療法の開発が急務である。現在広く研究に用いられているHBV感染系は、HBV複製レベルの定量に細胞の溶解等を必要とする。その操作は煩雑で細胞を経時的に観察することも出来ない。本研究ではHBVのゲノム内に低分子量蛍光活性化タンパク質(Y-FAST)を導入し、HBV感染細胞を蛍光により観察可能なシステムを開発する。感染細胞を簡便に分離可能で、細胞を溶解することなく経時的に観察できる。これは簡便な抗HBV薬評価システムとなり、また、細胞共培養や組織を用いた感染系でHBV複製と炎症との関連を解明可能な方法となり得るため、抗HBV薬の開発やHBVの病態解明に有用である。
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| 研究実績の概要 |
本研究では蛍光活性化タンパク質（Y-FAST）を用いたB型肝炎ウイルス（HBV）検出系の構築とその応用を目指す。
前年度までに完成させたY-FASTを導入した組換えウイルスの感染効率やウイルス産生量が高くないことが明らかとなったため、当該年度においては組換えウイルスを恒常的に発現するウイルスの産生を計画した。現在も恒常発現株の作製を進めている。
また細胞を培養器から遊離させず検出する際の方法についても検討を行った。
さらに本研究の蛍光活性化タンパク質を用いたHBVレポーター系を用いたウイルス検出システムの評価や収量の向上に資するため、各種新規合成化合物を添加した場合のHBV複製レベル変動について試験を行った。その結果、細胞死のない濃度でHBV複製レベルを抑制する新規化合物や、HBVの細胞外放出を抑制すると考えられる新規化合物を見出した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
作製した組換えウイルスは感染効率あるいは感染後の複製効率が悪いことが推定され、感染細胞の検出が困難であったため。
このため、ベクターの構築や検出感度を見直し、異なる系の構築を行なっている。
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| 今後の研究の推進方策 |
組換えB型肝炎ウイルスの一過性発現によるウイルス産生量が充分ではないことが推察されたので、恒常発現株の作製を行う。また、検出系を変更し、より広い範囲の感染複製レベルを検出可能にする予定である。
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