| 研究課題/領域番号 |
20K17555
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分55010:外科学一般および小児外科学関連
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| 研究機関 | 香川大学 |
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研究代表者 |
藤井 喬之 香川大学, 医学部, 助教 (00746696)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2021年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2020年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | 腸管不全合併肝障害 / 短腸症候群 / 腸肝軸 / 腸内細菌 / 食物繊維 / 短鎖脂肪酸 / 低分子グアーガム分解物 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
①(ⅰ) IFALDモデルを用いて、コントロールとして肝臓、腸管の病理学的、免疫学的評価、 肝機能の生化学的評価、便中短鎖脂肪酸の評価、腸内細菌叢の評価を行う。(ⅱ) Shamモデルも同様の項目を評価する。②（IFALD + PHGG)モデル、（Sham+ PHGG)モデルを作成してそれぞれ①と同様の項目を評価する。③ ①、②の結果から、IFALDモデルにおけるPHGG投与による肝臓、腸管の病理組織学的、免疫学的変化や肝機能の変化、短鎖脂肪酸の変化、腸内細菌叢の変化を解析する。④ IFALDを予防するPHGG投与の至適量、至適時期を決定する。
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| 研究実績の概要 |
6週齢のC57BL/6マウスをコントロール群、肝障害モデル：Liver injury (LI)群、LI/PHGG群（5%のPHGGを添加）に分けた（各n=6）。実験開始から17日目にサクリファイスした。肝障害を病理組織学的に評価するためoil red O染色と抗TNF-α抗体による免疫染色を行った。腸内細菌叢の変化を評価するため、実験開始前の便と、17日目の回腸内容物を採取して16S rRNAメタゲノム解析を行った。腸内細菌叢のパターンをPCoAで解析し、細菌叢の群間比較のためLEfSe解析を行った。さらに便中SCFA（乳酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸）を高速液体クロマトグラフ法で測定した。
LI群はコントロール群に比べて有意に肝臓の脂肪蓄積を認めた。しかし、この脂肪蓄積はPHGGの投与でLI群より有意に減少した。また、PN群では偽胆管の増生が見られ、コントロール群に比べて有意にTNF-α陽性細胞の増加を認めた。腸内細菌のPCoA解析ではPHGG群は他の2群に比べて大きな変化が見られた。LEfSe解析ではPHGGの投与でParabacteroides とEnterobacteriaceaeが有意に増加していた。PHGG投与によるSCFAの増加は見られなかった。
PHGGはマウス肝障害モデルにおいて肝保護作用を示した。しかし、SCFAの増加は認めず、SCFAを介さない機序での肝保護効果があると推測された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
肝障害モデルを用いてPHGGの肝保護効果と腸内細菌叢の変化の解析を行うことが出来た。
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| 今後の研究の推進方策 |
肝障害モデルを用いてPHGGの腸管粘膜に与える影響を総合的に解析する。具体的には絨毛高の増大、陰窩の深さといった形態学的評価に加え、組織スコアを用いて小腸上皮の変性を評価する。また、CD45による免疫染色を行い炎症性細胞浸潤の程度を評価する。さらに腸管内洗浄液を採集して分泌型IgAを測定する(ELISA法)予定である。
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