| 研究課題/領域番号 |
20K17671
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分55020:消化器外科学関連
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
吉田 枝里 弘前大学, 医学部附属病院, 助教 (20648886)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
2022年度: 130千円 (直接経費: 100千円、間接経費: 30千円)
2021年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2020年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円)
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| キーワード | 4-methylumbelliferone / gastric cancer / PD-L1 / ４－メチルウンベリフェロン / 胃癌 / 間質制御 / 抗癌剤 / 抗体治療 / ヒアルロン酸合成阻害 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
MUはヒアルロン酸合成を特異的に抑制し、その結果間質が粗造化されて抗癌剤の細胞内移行性が高まることが認められている。そこで、MUを既存の抗癌剤、抗体と同時に投与し、抗癌剤の作用および抗体の作用を増強させることで効果的な治療ができると考えた。MUは以前利胆剤とし発売されていた実績があり、他の新薬に比べ臨床応用も短期間で可能である。ヒトへの投与を見据えてMUの至適濃度、投与スケジュール、副作用の出現とその頻度、抗癌剤、抗体との併用におけるその至滴投与濃度について明らかにする。
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| 研究実績の概要 |
胃癌細胞KATO-Ⅲ、OCUM-1を培養し、遠心のうえ細胞ペレットを収集。ライシスバッファー処理後の上清を検体とした。ウエスタンブロットにてPD-L1の発現を検出した。また、細胞をホルムアルデヒド固定ののち、PBS処理した細胞ペレットを使用しフローサイトメトリーを行った。他、胃癌細胞を培養し、ヒアルロン酸の定量、細胞外マトリックスの可視化を行った。MU処理後の細胞は、ヒアルロン酸結合タンパクを用いた免疫染色でヒアルロン酸を可視化した。ヒアルロン酸結合タンパクを用いたELISA法で細胞層ヒアルロン酸量定量を行った。MUの細胞増殖抑制効果は血球計算板を用いて培養細胞数を計測することで検討した。
胃癌細胞は両株にてPD-L1の発現を認めた。MU処理により胃癌細胞はHA量の減少、細胞外マトリックスの可視領域の減少が認められた。MU処理した細胞でのPD-L1発現の減少を認めた。血漿からゾレドロネートおよびインターロイキン-2で刺激されたγδT細胞に富む末梢血単核細胞（PBMC）を抽出し、細胞増殖をMU存在下で検討した。MU存在下ではPBMCの細胞毒性が増強した。T 細胞機能は、フローサイトメトリーと乳酸脱水素酵素アッセイによって分析した。MU存在下で、T細胞機能の増強を認めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
診療制限、実験設備制限により動物実験が今年度不可能であった。
また、96well等の実験物品の入荷遅延等材料不足に陥った。
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| 今後の研究の推進方策 |
MU存在下で胃癌細胞がこれまでの実験同様HA量の減少、免疫細胞の細胞障害性の増強を認めた。また、PD-L1発現の低下を認めたが、これは線維芽細胞抑制にともなう癌細胞周囲微小環境の変化による結果と考えられ、癌細胞周囲微小環境に対する検討を加えることでメカニズムの解明をはかる。また、MUと抗PD抗体の併用治療についてin vitroで実験を開始する。
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