研究課題/領域番号 |
20K17697
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研究種目 |
若手研究
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配分区分 | 基金 |
審査区分 |
小区分55020:消化器外科学関連
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研究機関 | 横浜市立大学 |
研究代表者 |
三宅 謙太郎 横浜市立大学, 附属病院, 助教 (40856283)
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研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2020年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
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キーワード | メチオニン / 膵癌 / JAK2/STAT3 pathway / プロテオーム解析 / TRAIL-R2 |
研究開始時の研究の概要 |
多くのヒト腫瘍細胞は正常細胞に比して必須アミノ酸であるメチオニン依存性が高い。 メチオニン制限は腫瘍細胞のアポトーシス誘導、細胞周期の可逆的停止を引き起こす。 しかしその機序は完全には解明されていない。我々は既にin vitroでメチオニン制限が膵癌細胞のTNF-α関連アポトーシス誘導リガンド受容体(TRAIL-R2)発現量を増加させることを確認しており、本研究ではメチオニン制限と抗TRAIL-R2抗体の併用効果を検証し、新たな膵癌治療の開発、臨床応用への研究基盤を確立する。さらに、プロテオーム解析によってメチオニン制限が膵癌細胞にもたらす分子生物学的変化を解析し、新たな治療標的を模索する。
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研究実績の概要 |
メチオニン制限が膵癌細胞にもたらす生物学的変化を明らかにするために、プロテオーム解析、IPA解析を行い、メチオニン制限が膵癌増殖に関与するJAK2/STAT3経路に影響を及ぼしていることが確認できた。前年度に検証したPanc-1以外のその他の膵癌細胞株(Mia-Paca2、Capan-1)においてもWBやPCRでメチオニン制限によってSTAT3が減少していることが確認できた。また、JAK2/STAT3 pathwayに関与するNF-kBに関しても同様に3種の膵癌細胞株でメチオニン制限群の細胞でその発現量が減少していることをNF kappab p65 ELISA Kit(#ab176648, abcam) を用いて確認した。 また、vivoにおいてもメチオニン制限の抗腫瘍効果を検証すべく、ヌードマウスの皮下にMiaPaCa-2を移植し膵癌皮下腫瘍モデルを作成した。メチオニン制限の抗腫瘍効果を検証した。作成したMia-Paca2皮下腫瘍マウスを、通常食群とメチオニン制限群の2群に分け、皮下腫瘍の大きさ、体重を4週間にわたって計測した。メチオニン制限食はResearch Diet, Inc (#A11051301B)から購入したものを使用した。メチオニン制限群は通常食群と比較して有意に腫瘍の縮小を認めた。実験期間中、両群間の平均体重に差は認めなかった。また、両群間の切除検体を免疫組織学的染色でSTAT3発現に関して抗STAT3抗体 (#ab68153, Abcam)を用いて染色し、比較検討したところ、メチオニン制限食群では有意にSTAT3は発現の減少を認めた。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
動物実験においても同様にメチオニン制限が抗腫瘍効果を示すことが検証できた。
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今後の研究の推進方策 |
プロテオーム解析のValidationで不足している部分を補いつつ、学会発表や論文化を目指していく。
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