研究課題/領域番号 |
20K18206
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研究種目 |
若手研究
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配分区分 | 基金 |
審査区分 |
小区分56040:産婦人科学関連
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研究機関 | 大阪医科薬科大学 |
研究代表者 |
大門 篤史 大阪医科薬科大学, 医学部, 助教 (20846894)
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研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2022年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
2021年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2020年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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キーワード | iPS細胞 / 流産モデルマウス / 血管新生因子 / CD34 / CD31 / CD45 / 流産率 / ヒトiPS細胞 / 不育症 / 妊娠高血圧腎症 / 血管内皮細胞 |
研究開始時の研究の概要 |
血管内皮細胞を含むマウス多能性幹細胞由来細胞群(マウスPSC-EPs)を自然発生の不育症・妊娠高血圧腎症(preeclampsia, PE)モデルマウスに移植すると、胎仔母胎血管が増加し、流産率が低下することを明らかにした。このモデルマウスに血管内皮細胞を含むヒトiPS細胞由来細胞群(ヒトPSC-EPs)を移植しても流産率が低下する傾向をつかんだ。本研究では、今後の臨床応用へ向け、この不育症・PEモデルマウスに対するヒトPSC-EPsの治療効果を確定させ、さらにヒトPSC-EPs投与の安全性、そして、その作用機序を解析する。これらの解析から、ヒト不育症・PEの有効な治療法確立の一歩とする。
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研究実績の概要 |
ヒトiPS細胞を既存のプロトコルに従ってEPCに分化させ、その細胞特性の解析を行った。EPCは末梢血中の単核球成分のうち、CD34陽性細胞としてこれまでに多くの論文で特徴付けられており、そのほか造血幹細胞表面抗原のCD133や、血管内皮細胞表面抗原のCD31を発現する。また血球系細胞表面抗原であるCD45は発現しないとされている。まず分化させた細胞をRT-qPCR、FACSで解析し、さらに分化誘導2.5.8日目でその発現量の変化をそれぞれ確認した。RT-qPCRでは分化誘導5日目でCD34の発現量が最も多く、FACSでは分化誘導8日目でCD34陽性細胞の割合が高かった。CD31は日数を経るごとに発現増加する傾向であった。いずれの分化誘導日数においてもCD45の発現は認めず、CD133は日数による有意差は認めなかった。RT-qPCR、FACSの結果より、分化誘導5日目のヒトiPS細胞由来EPCを妊娠6.5-7.5日目の流産モデルマウスに尾静脈投与したところ、流産率はコントロール群で27.1%であったのに対し、細胞投与群では13.6%(P<0.04)と低下を認めた。次に流産率改善の機序を検討するため、胎盤組織の透明化を行い、GFP標識したヒトiPS-EPCs(GFP-EPCs)を投与した。GFP-EPCsによる直接的な血管形成は観察できなかったが、胎盤に細胞が局在していることが確認でき、RT-qPCRでは胎盤において血管新生因子であるVEGF、PlGFの上昇が見られた。ヒトiPS-EPCsは流産モデルマウスにおいて血管新生因子を増加させ、流産率を改善すると考えられる。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
実験が想定よりも時間を要したため、進捗状況はやや送れているが、現在論文作成中で論文投稿を急いでいる。
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今後の研究の推進方策 |
現在論文作成中である。 リバイスで追加実験が求められることが予想されるため、マウスの継続飼育やiPS細胞の継代を今後も続けていく。
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