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一分子蛍光による生体分子のダイナミクス解明に資する全光子タイムタグ計測法の確立

研究課題

研究課題/領域番号 20K21166
研究種目

挑戦的研究(萌芽)

配分区分基金
審査区分 中区分32:物理化学、機能物性化学およびその関連分野
研究機関東北大学

研究代表者

高橋 聡  東北大学, 多元物質科学研究所, 教授 (30283641)

研究期間 (年度) 2020-07-30 – 2022-03-31
研究課題ステータス 完了 (2021年度)
配分額 *注記
6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円)
2021年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
2020年度: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円)
キーワード高速蛍光相関分光法 / 全光子time-tag測定法 / 蛋白質ダイナミクス / ハイブリッド光検出器 / タンパク質ダイナミクス / 一分子蛍光観察 / 全光子time-tag計測
研究開始時の研究の概要

本研究では、全光子time-tag測定を新しく開発し、タンパク質ダイナミクスを検出する蛍光計測の効率を劇的に向上させる。すでに申請者はこの装置の開発を開始しているが、デジタル型高速光子計数ボードを新しく導入し、不感時間が2ns以内の高い繰り返し速度にて、一光子ごとに観測時間を記録する全光子time-tag計測を可能とする装置開発を行う。この手法により、タンパク質機能にとって大切な2ns以降の時間領域における全てのダイナミクスのデータを高効率で取得可能とする。

研究成果の概要

蛍光の強度ゆらぎを観測する蛍光相関分光法は、タンパク質の高速ダイナミクスを解明する有用な手法である。本研究では、ハイブリッド光検出器(HPD)とデジタル型計数ボードを組み合わせた全光子time-tag測定法を開発し、蛍光相関を高精度で検出することを目的とした。装置開発の結果得られた相関データには多数のスパイク状のノイズが見られた。このノイズは、HPDが示すアフターパルスに由来することを突き止め、相関データからノイズをキャンセルすることに成功した。以上の努力により、従来法では一晩以上の必要だったデータの積算時間が短縮され、一時間程度の測定で10ナノ秒以降の蛍光相関の測定が可能になった。

研究成果の学術的意義や社会的意義

タンパク質の高速のダイナミクスを調べることで、タンパク質の運動を正確に理解し、生物がどのような方法で精密な酵素反応や特定の相手との相互作用を可能にしているのかを理解することができる。本研究成果は、そのための新しい効率的な計測方法を提案するものである。本測定方法を用いることで、従来は10時間程度の長時間のデータの積算が必要だった計測が、一時間程度のデータ積算で可能になることが示された。また、従来方法に比べてS/Nの良いデータを得ることが可能になった。この手法をタンパク質などの生体分子に適応することで、酵素反応などを正しく理解し応用することが可能になると予想される。

報告書

(3件)
  • 2021 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2020 実施状況報告書
  • 研究成果

    (8件)

すべて 2022 2021 2020 その他

すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (2件) (うち国際共著 1件、 査読あり 2件) 学会発表 (5件) (うち招待講演 2件)

  • [国際共同研究] Indian Institute of Technology Madras(インド)

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [雑誌論文] Quantification of Entropic Excluded Volume Effects Driving Crowding-Induced Collapse and Folding of a Disordered Protein2022

    • 著者名/発表者名
      Rajendran Divya、Mitra Shrutarshi、Oikawa Hiroyuki、Madhurima Kulkarni、Sekhar Ashok、Takahashi Satoshi、Naganathan Athi N.
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry Letters

      巻: 13 号: 13 ページ: 3112-3120

    • DOI

      10.1021/acs.jpclett.2c00316

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / 国際共著
  • [雑誌論文] Unique Electronic Structures of the Highly Ruffled Hemes in Heme-Degrading Enzymes ofStaphylococcus aureus, IsdG and IsdI, by Resonance Raman and Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopies2020

    • 著者名/発表者名
      Takahashi Satoshi、Nambu Shusuke、Matsui Toshitaka、Fujii Hiroshi、Ishikawa Haruto、Mizutani Yasuhisa、Tsumoto Kouhei、Ikeda-Saito Masao
    • 雑誌名

      Biochemistry

      巻: 59 号: 40 ページ: 3918-3928

    • DOI

      10.1021/acs.biochem.0c00731

    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] Conformational dynamics of E. coil Cytidine Repressor DNA Binding domain studied by Single-molecule Fluorescence Spectroscopy2021

    • 著者名/発表者名
      Shrutarshi Mitra,Hiroyuki Oikawa,Divya Rajendran,Athi N.Naganathan,Satoshi Takahashi
    • 学会等名
      The 59th Annual Meeting of the Biophysical Society of Japan
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 一分子蛍光分光法を用いた生体高分子の構造形成2021

    • 著者名/発表者名
      髙橋 聡
    • 学会等名
      「物質階層原理研究」&「ヘテロ界面研究」合同研究会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] タンパク質のフォールディング研究:物性研究と生命研究の境界2020

    • 著者名/発表者名
      髙橋 聡
    • 学会等名
      東北大学生命科学研究科主催「勉強会:それ、生命に聴いてみよう!」
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] Conformational properties of the intrinsically-disordered RGG domain of LAF-1 detected by single-molecule fluorescence spectroscopy2020

    • 著者名/発表者名
      Kimura, M.; Nakano, S.; Takahashi, Y.; Oikawa, H.; Takahashi, S.
    • 学会等名
      第58回日本生物物理学会年会(オンライン)
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書
  • [学会発表] 天然変性タンパク質 LAF-1 RGGドメインの一分子蛍光分光測定による構造特性評価2020

    • 著者名/発表者名
      木村美智子, 中野沙耶, 高橋泰人, 小井川浩之, 高橋 聡
    • 学会等名
      分子科学会オンライン討論会
    • 関連する報告書
      2020 実施状況報告書

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公開日: 2020-08-03   更新日: 2023-01-30  

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