研究課題/領域番号 |
20K21662
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研究種目 |
挑戦的研究(萌芽)
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配分区分 | 基金 |
審査区分 |
中区分56:生体機能および感覚に関する外科学およびその関連分野
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研究機関 | 順天堂大学 |
研究代表者 |
神谷 和作 順天堂大学, 医学部, 准教授 (10374159)
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研究期間 (年度) |
2020-07-30 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円)
2022年度: 520千円 (直接経費: 400千円、間接経費: 120千円)
2021年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2020年度: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
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キーワード | 遺伝性難聴 / 人工多能性幹細胞 / 内耳 / ギャップジャンクション / 分化誘導 / 遺伝子難聴 |
研究開始時の研究の概要 |
遺伝性難聴において世界で最も高頻度に発生するCX26変異型遺伝性難聴の治療には蝸牛支持細胞、蝸牛線維細胞のギャップ結合によるイオン輸送能の修復が必要である。 本研究では、「幹細胞ホーミング機構」と呼ばれる、目的部位に幹細胞を誘導する分子機構を応用し、蝸牛組織内に大量の移植細胞を誘導する革新的技術開発を目的とした。内耳および移植細胞における幹細胞ホーミング機構を増強させることにより細胞生着を効率化し、遺伝性難聴の根本的治療法開発を行う。
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研究実績の概要 |
コネキシン(CX)26をコードするGJB2遺伝子の変異は、世界で最も高頻度に出現する難聴原因遺伝子である。 遺伝性難聴の根本的治療法は存在しないが、多機能性幹細胞を用いた再生医療の応用が期待されている。研究代表者らは、内耳ギャップ結合を形成するCX26の内耳特異的欠損マウスを開発し、ギャップ結合崩壊による発症機構を解明し、この異常ギャップ結合を遺伝子導入により修復することで聴力回復させる内耳遺伝子治療法を開発した。幹細胞から作製した内耳前駆細胞を蝸牛組織へ導入するためには蝸牛組織に適切な幹細胞ホーミングと呼ばれる細胞誘導の分子機構を理解し応用することが重要である。本研究では、この機構を高めることにより遺伝性難聴の内耳組織へ適切な細胞を効率的に補充し、聴力を回復させる技術開発を目的とする。本年度は移植用細胞として多能性幹細胞由来の内耳用細胞を開発するため、これまで確立した分化誘導法のさらなる改良を目指した。蝸牛支持細胞の特徴を有するヒトiPSC由来の機能性CX26ギャップジャンクション形成細胞(iCX26GJCs)を作製することを試みたところ、このiCX26GJCsは、細胞-細胞間の境界にギャップジャンクションプラーク様の形態を持ち、蝸牛支持細胞で発現するいくつかのマーカーの発現を確認した。さらに、典型的なGJB2変異を持つ患者のiPS細胞からiCX26GJCsを作製し、GJB2関連難聴の病態を再現することに成功した。これらのin vitroモデルは、GJB2関連難聴の様々な変異に対する最適な治療法の確立や薬剤スクリーニングに有用であると考えられ、国際誌にも論文発表した(Human Molecular Genetics, 2021)。同技術に更に作製条件を精査することにより、細胞境界にて凝集したギャップ結合複合体を形成する高分化型の細胞シートを作製することに成功した。さらにこれらを継代可能とする技術を開発し、移植用細胞としての応用が期待できる。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
分化誘導法に関し新たな改良法が得られ、安定的にギャップ結合形成細胞を形成させることが可能となった。これらの技術を応用することにより細胞治療に用いる移植細胞の開発が期待できるため。
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今後の研究の推進方策 |
得られた移植細胞を難聴モデルマウスにへ移植する技術を確立する。
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