ネコ免疫不全ウイルスの感染増殖機構の解明

• 研究課題/領域番号: 21380180
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 基礎獣医学・基礎畜産学
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 宮沢 孝幸 京都大学, ウイルス研究所, 准教授 (80282705)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 15,210千円 (直接経費: 11,700千円、間接経費: 3,510千円); 2011年度: 4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円); 2010年度: 5,200千円 (直接経費: 4,000千円、間接経費: 1,200千円); 2009年度: 5,200千円 (直接経費: 4,000千円、間接経費: 1,200千円)
• キーワード: ネコ免疫不全ウイルス / インターフェロン / ISGylation / UBEL1 / 免疫不全 / クローニング / 抗ウイルス / ISG15 / 受容体 / 感染 / CD134 / リンパ球 / 変異 / CXCR4 / エンベロープ

研究概要

ネコはネコ免疫不全ウイルス(FIV)に感染すると、数年以上もの長い無症候キャリアー期を経て免疫不全状態になり、ネコヘルペスウイルスやネコカリシウイルスなどの感染症により死亡する。しかしながら大規模な疫学調査により、発症せずに6年以上経過するネコの割合も多いことが明らかになってきた。FIVの感染による後天性免疫不全症候群発症にはウイルス側の要因、ネコの遺伝学的および免疫学的背景、その他の感染要因が複雑に絡み合っていると考えられる。FIVを抑制する宿主因子はいくつか想定されている。ISG15はI型IFN刺激により発現される遺伝子の1つで、同分子がもつユビキチン様活性(ISG化活性)により様々なウイルスに対して抗ウイルス活性を示し、FIVにおいても抵抗性を発揮すると考えられる。ISG化にはISG15以外にISG化関連酵素群の共発現が必要である。そこで酵素群の1つであるネコUBE1L(FeUBEID遺伝子のクローニングを行い、さらに、各種細胞でのFeUBE1Lの発現状況およびI型IFN刺激による発現誘導の有無を確認した。CRFK細胞のcDNAライブラリーから、これまでに決定したFeUBE1L遺伝子配列をもとに設計したプライマーを用いてPCRを行い、全長のクローンを得た。また、未感作、ネコIFN-ω(FeIFN-ω)およびウシIFN-τ(BoIFN-τ)感作のFeT-J、3201、CRFK、fcwf-4、G355-5細胞でのFeUBE1L遺伝子の発現量をReal-Time RT-PCR法により定量した。FeUBE1LはFeIFN-ωおよびBoIFN-τにより誘導されることが明らかとなった。FeUBE1遺伝子のクローニングに成功したことから、今後、FeISG15の共発現により、in vitroでのISG化の系が確立でき、抗ウイルス活性のメカニズムを解明できると考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] Identification and Characterization of Feline UBE1L Gene (2012)
  • 著者名/発表者名: Sayumi Shimode, Takayuki Miyazawa, Takeshi Kobayashi, Hisaaki Sato, Taishi Tanabe
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 74 号: 2 ページ: 235-239
  • DOI: 10.1292/jvms.11-0337
  • NAID: 130001033063
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり
• [雑誌論文] Adaptation of feline immunodeficiency virus subtype B strain TM2 to a feline astrocyte cell line(G355-5 cells). (2011)
  • 著者名/発表者名: Ishikawa M, Baba K, Shimojima M, Okada M, Shojima T, Miura T, Miyazawa T.
  • 雑誌名: Veterinary Microbiology 巻: 149 ページ: 307-315
  • 査読あり
• [雑誌論文] Susceptibility and production of a feline endogenous retrovirus(RD-114virus)in various feline cell lines. (2011)
  • 著者名/発表者名: Okada, M., Yoshikawa, R., Shojima, T., Baba, K., Miyazawa, T.
  • 雑誌名: Virus Research 巻: 155 ページ: 268-273
  • 査読あり
• [雑誌論文] Differential diagnosis of feline leukemia virus subgroups using pseudo-type viruses expressing green fluorescent protein. (2010)
  • 著者名/発表者名: Nakamura, M., Sato, E, Miura, T., Baba, K., Shimoda, T., Miyazawa, T.
  • 雑誌名: Journal of Veterinary Medical Science 巻: 72 ページ: 787-790
  • 査読あり
• [雑誌論文] Focus assay on FeLIX-dependent feline leukemia virus (2010)
  • 著者名/発表者名: Nakaya, Y., Shojima, T., Hoshino, S., Miyazawa, T.
  • 雑誌名: Journal of Veterinary Medical Science 72 ページ: 117-121
  • NAID: 130000134514
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation of an infectious endogenous retrovirus in a proportion of live Attenuated vaccines for pets (2010)
  • 著者名/発表者名: Miyazawa, T., Yoshikawa, R., Golder, M., Okada, M., Stewart, H., Palmarini, M.
  • 雑誌名: Journal of Virology 84 ページ: 3690-3694
  • 査読あり
• [雑誌論文] Differential diagnosis of feline leukemia virus subgroups using pseudotype viruses expressing green fluorescent (2010)
  • 著者名/発表者名: Nakamura, M., Sato, E., Miura, T, Baba, K., Shimoda, T., Miyazawa, T.
  • 雑誌名: Journal of Veterinary Medical Science 72(印刷中)
  • 査読あり
• [学会発表] ネコUBE1L遺伝子の全長クローニングならびに各種細胞でのI型インターフェロン応答性 (2011)
  • 著者名/発表者名: 下出紗弓、宮沢孝幸、今川和彦、田邊太志、佐藤久聡
  • 学会等名: 第152回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 大阪府立大学(大阪府)
  • 年月日: 2011-09-19
• [学会発表] Cellular and viral factors regulates the budding of feline endogenous Retrovirus. (2010)
  • 著者名/発表者名: Fukuma, A., Abe, M., Morikawa, Y., Miyazawa, T., Yasuda, J.
  • 学会等名: Cold Spring Harbor Laboratory Meeting "Retroviruses"
  • 発表場所: ニューヨーク、アメリカ
  • 年月日: 2010-05-26