低分子抗体医薬開発に最適化されたヒト抗体ライブラリ構築と選別法の確立

• 研究課題/領域番号: 21390032
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 創薬化学
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 伊東 祐二 鹿児島大学, 大学院・理工学研究科, 教授 (60223195)
• 研究分担者: 有馬 直道 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (30175997) ; 黒木 良太 独立行政法人日本原子力研究開発機構, 量子ビーム応用研究部門, ユニット長 (30391246)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 14,820千円 (直接経費: 11,400千円、間接経費: 3,420千円); 2011年度: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円); 2010年度: 3,250千円 (直接経費: 2,500千円、間接経費: 750千円); 2009年度: 7,670千円 (直接経費: 5,900千円、間接経費: 1,770千円)
• キーワード: 医薬分子機能学 / 抗体 / 低分子化抗体 / T7ファージ / ファージ提示法 / 安定性

研究概要

本研究では、T7ファージ提示技術を用いて、ヒト単鎖Fv抗体、ラマVHH抗体ライブラリを構築し、その中から抗原に特異的な抗体の単離手法の確立を行った。特に、VHH抗体ライブラリでは、抗原特異的な抗体の単離に成功したことから、本手法が、抗体の迅速な単離に十分活用できることが分かった。一方、抗体のフォールディングや安定性の問題により非特異的な抗体ファージの濃縮が見られ、今後の解決すべき課題として明らかになった。

研究成果

• [雑誌論文] Isolation and Affinity Maturation of Human IgA-Specific Peptide from Random Peptide T7 Phage Library for Designing a New IgA Affinity Ligand (2012)
  • 著者名/発表者名: Hatanaka T., Tsukamoto S., Sakamoto K., Arima K., Ito Y.
  • 雑誌名: Peptide Science 2011 ページ: 25-26
  • NAID: 10030203951
  • 査読あり
• [雑誌論文] A mimotope peptide of Aβ42 fibril-specific antibodies with Aβ42 fibrillation inhibitory activity induces anti-Abeta42 conformer antibody response by a displayed form on an M13 phage in mice (2011)
  • 著者名/発表者名: Tanaka, K., Nishimura, M., Yamaguchi, Y., Hashiguchi, S., Takiguchi, S., Yamaguchi, M., Tahara, H., Gotanda, T., Abe, R., Ito, Y., Sugimura, K.
  • 雑誌名: Journal of neuroimmunology 巻: 236 号: 1-2 ページ: 27-38
  • DOI: 10.1016/j.jneuroim.2011.04.010
  • 査読あり
• [雑誌論文] A mimotope peptide of Abeta42 fibril-specific antibodies with Abeta42 fibrillation inhibitory activity induces anti-Abeta42 conformer antibody response by a displayed form on an M13 phage in mice (2011)
  • 著者名/発表者名: Tanaka, K., Nishimura, M., Yamaguchi, Y., Hashiguchi, S., Takiguchi, S., Yamaguchi, M., Tahara, H., Gotanda, T., Abe, R., Ito, Y., Sugimura, K.
  • 雑誌名: J Neuroimmunol 巻: 236 ページ: 27-38
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterization of human single-chain antibodies against highly pathogenic avian influenza H5N1 viruses : mimotope and neutralizing activity (2010)
  • 著者名/発表者名: Yang, J., Yoshida, R., Kariya, Y., Zhang, X., Hashiguchi, S., Nakashima, T., Suda, Y., Takada, A., Ito, Y., Sugimura, K.
  • 雑誌名: Journal of biochemistry 巻: 148 ページ: 507-515
  • DOI: 10.1093/jb/mvq084
  • NAID: 10027879101
  • 査読あり
• [雑誌論文] ファージディスプレイBeyond antibody:～抗体様分子による分子標的～ (2010)
  • 著者名/発表者名: 橋口周平、伊東祐二、田中孝一、松木園美穂、村岡賢、杉村和久
  • 雑誌名: 生化学 巻: 82 ページ: 710-726
• [雑誌論文] Short communication : generation of recombinant monoclonal antibodies against an immunodominant HLA-A 2402-restricted HIV type 1 CTL epitope (2009)
  • 著者名/発表者名: Nunoya, J., Nakashima, T., Kawana-Tachikawa, A., Kiyotani, K., Ito, Y., Sugimura, K., Iwamoto, A.
  • 雑誌名: AIDS research and human retroviruses 巻: 25 ページ: 897-904
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effective induction of cell death on adult T-cell leukaemia cells by HLA-DRbeta-specific small antibody fragment isolated from human antibody phage library (2009)
  • 著者名/発表者名: Muraoka, S., Ito, Y., Kamimura, M., Baba, M., Arima, N., Suda, Y., Hashiguchi, S., Torikai, M., Nakashima, T., Sugimura, K.
  • 雑誌名: Journal of biochemistry 巻: 145 号: 6 ページ: 799-810
  • DOI: 10.1093/jb/mvp039
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of T cell response by blocking the ICOS signal with the B7RP-1-specific small antibody fragment isolated from human antibody phage library (2009)
  • 著者名/発表者名: Maeda, M., Ito, Y., Hatanaka, T., Hashiguchi, S., Torikai, M., Nakashima, T., Sugimura, K.
  • 雑誌名: MAbs 巻: 1 ページ: 453-461
  • URL: http://www.landesbioscience.com/journals/mabs/9633
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of T cell response by blocking the ICOS signal with the B7RP-1-specific small antibody fragment isolated from human antibody phage library (2009)
  • 著者名/発表者名: Maeda, M., Ito, Y., Hatanaka, T., Hashiguchi, S., Torikai, M., et al.
  • 雑誌名: mAb 1 ページ: 450-457
  • 査読あり
• [雑誌論文] Discovery and characterization of a peptide motif that specifically recognizes a non-native conformation of human IgG induced by acidic pH conditions (2009)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto K., Ito Y., Hatanaka T., et al.
  • 雑誌名: The Journal of biological chemistry 284 ページ: 9986-9993
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effective Induction of Cell Death on Adult T-Cell Leukemia Cells by HLA-DR{beta}-Specific Small Antibody Fragment Isolated From Human Antibody Phage Library (2009)
  • 著者名/発表者名: Muraoka S., Ito Y., Kamimura M., Baba M., Arima N., Suda Y., et al.
  • 雑誌名: Journal of biochemistry 145 ページ: 799-810
  • 査読あり
• [学会発表] ファージディスプレイ技術による機能性ペプチド・抗体のデザインと応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 伊東祐二
  • 学会等名: 第11回化学・材料研究セミナー
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 2012-01-07
• [学会発表] ファージディスプレイ技術による機能性ペプチド・抗体のデザインと応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 伊東祐二
  • 学会等名: 第11回化学・材料研究セミナー
  • 発表場所: 九州大学、福岡市(招待講演)
  • 年月日: 2012-01-07
• [学会発表] Peptide designs for affinity ligands of immunoglobulin by random peptide phage library (2011)
  • 著者名/発表者名: Yuji Ito
  • 学会等名: 15^<th> Korean Peptide and Protein Symposium
  • 発表場所: Ochag (Korea)(招待講演)
  • 年月日: 2011-12-01
• [学会発表] T7ファージディスプレイによる抗体ライブラリの構築と評価 (2011)
  • 著者名/発表者名: 塚本翔悟, 畠中孝彰, 有馬一成, 伊東祐二
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2011-09-21
• [学会発表] T7ファージディスプレイによる抗体ライブラリの構築と評価 (2011)
  • 著者名/発表者名: 塚本翔悟、畠中孝彰、有馬一成、伊東祐二
  • 学会等名: 第84回日本生化学会
  • 発表場所: 京都市
  • 年月日: 2011-09-21
• [学会発表] T7ファージライブラリを用いたヒト抗体結合ペプチドのデザインと評価,第4回生体分子科学シンポジウム (2011)
  • 著者名/発表者名: 伊東祐二
  • 学会等名: 第2回ケミカルバイオロジー研究所シンポジウム
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2011-03-04
• [学会発表] ファージライブラリによるヒト抗体結合性ペプチドリガンドの探索と応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 伊東祐二
  • 学会等名: 第4回 生体分子科学シンポジウム
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2011-03-04
• [学会発表] Tファージ提示法による機能性抗体とペプチドのデザイン (2010)
  • 著者名/発表者名: 伊東祐二
  • 学会等名: 大阪大学蛋白質研究所セミナー「バクテリオファージ研究の可能性と課題
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2010-09-10
• [学会発表] 高機能性低分子化抗体の単離を目指したT7ファージによる抗体ライブラリの構築 (2010)
  • 著者名/発表者名: 塚本翔悟, 畠中孝彰, 有馬一成, 伊東祐二
  • 学会等名: 平成22年度日本生化学会九州支部例会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2010-05-22
• [学会発表] Selections of cell-specific antibodies and Ig-specific peptides by phage display : their potentials for clinical and industrial uses (2010)
  • 著者名/発表者名: Ito Y
  • 学会等名: 2010 KSBB (Korean Society for Biotechnology and Bopscience) Spring Meeting and International Symposium
  • 発表場所: ソウル(韓国)
  • 年月日: 2010-04-16
• [学会発表] T7ファージライブラリを用いたヒト抗体結合ペプチドのデザインと評価 (2009)
  • 著者名/発表者名: 伊東祐二
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会シンポジウム:Beyond antibody という研究領域
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド(神戸市)
  • 年月日: 2009-10-21
• [学会発表] ペプチドライブラリを用いたヒト抗体結合ペプチドのデザインと評価 (2009)
  • 著者名/発表者名: 伊東祐二
  • 学会等名: 第9回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 熊本全日空ホテルニュースカイ(熊本市)
  • 年月日: 2009-05-20
• [図書] ファージディスプレイBeyond antibody :～抗体様分子による分子標的～ (2010)
  • 著者名/発表者名: 橋口周平、伊東祐二、田中孝一、松木園美穂、村岡賢、杉村和久
  • 出版者: 生化学
• [産業財産権] IgG結合性ペプチド (2012)
  • 発明者名: 伊東祐二
  • 権利者名: 鹿児島大学
  • 取得年月日: 2012-03-23
• [産業財産権] IgA結合性ペプチド及びそれによるIgAの精製 (2011)
  • 発明者名: 伊東祐二、伊東治、大薗慎二、石飛宏幸
  • 権利者名: 鹿児島大学、大塚化学(株)
  • 産業財産権番号: 2011-262871
  • 出願年月日: 2011-11-30
• [産業財産権] IgG結合性ペプチド及びそれによるIgGの検出および精製方法 (2011)
  • 発明者名: 伊東祐二
  • 権利者名: 鹿児島大学、大塚化学株式会社
  • 産業財産権番号: 2011-182539
  • 出願年月日: 2011-08-24
• [産業財産権] IgG結合性ペプチド及びそれによるIgGの検出および精製方法 (2010)
  • 発明者名: 伊東祐二
  • 権利者名: 鹿児島大学、大塚化学(株)
  • 産業財産権番号: 2011-182539
  • 出願年月日: 2010-08-24
• [産業財産権] 特許出願 (2010)
  • 発明者名: 伊東祐二
  • 権利者名: 鹿児島大学・大塚化学
  • 出願年月日: 2010-05-24