プロテインキナーゼを網羅的に検出する抗体の新しい活用法とその応用研究

• 研究課題/領域番号: 21510226
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物分子科学
• 研究機関: 香川大学
• 研究代表者: 亀下 勇 香川大学, 農学部, 教授 (60127941)
• 研究分担者: 末吉 紀行 香川大学, 農学部, 准教授 (90346635)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2011年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2010年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2009年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: 生体機能関連物質 / プロテオミクス / プロテインキナーゼ / シグナル伝達 / 網羅的解析 / バイオテクノロジー / モノクローナル抗体 / キノコ / ゼブラフィッシュ / 胚発生 / インスリン分泌 / 糖尿病 / 二次元電気泳動

研究概要

プロテインキナーゼを網羅的に検出する抗体(マルチPK抗体)の様々な利用法を検討した。キノコ、植物、ゼブラフィッシュなどを材料として、発現スクリーニングを行い、取得した新規プロテインキナーゼの解析を行った。また、マルチPK抗体を利用した新しいプロテインキナーゼ解析法を確立し、その手法を用いて糖尿病の発症と密接に関わるプロテインキナーゼを同定した。これらの研究から、マルチPK抗体が様々なプロテインキナーゼの研究に利用できる有用なツールとなることが明らかになった。

研究成果

• [雑誌論文] Knockdown of two splice variants of Ca^<2+>/ calmodulin-dependent protein kinase Iδcauses developmental abnormalities in zebrafish, Danio rerio (2012)
  • 著者名/発表者名: Senga, Y., Nagamine, T., Kameshita, I., Sueyoshi, N.
  • 雑誌名: Arch. Biochem. Biophys 巻: 517 ページ: 71-82
• [雑誌論文] Knockdown to two splice variants of CaM kinase Iδ causes developmental abnormalities in zebrafish, Danio rerio (2012)
  • 著者名/発表者名: 千賀由佳子, 他
  • 雑誌名: Archives of Biochemistry and Biophysics 巻: 517 ページ: 71-82
  • 査読あり
• [雑誌論文] Functional processing of nuclear CaMKP (CaMKP-N) : evidence for a critical role of proteolytic processing in the regulation of its catalytic activity, substrate targeting in vivo (2012)
  • 著者名/発表者名: 末吉紀行, 他
  • 雑誌名: Archives of Biochemistry and Biophysics 巻: 517 ページ: 43-52
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of protein kinase substrates in tissue extracts after separation by isoelectric focusing (2011)
  • 著者名/発表者名: Senga, Y., Nagamine, T., Sekiguchi, M., Kaneko, K., Sueyoshi, N., Kameshita, I.
  • 雑誌名: Anal. Biochem 巻: 408 ページ: 345-347
• [雑誌論文] Calcium/ calmodulin-dependent protein kinase IV involvement in the pathophysiology of glucotoxicity in rat pancreatic beta-cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Sugiyama, Y., Murao, K., Imachi, H., Sueyoshi, N., Ishida, T., Kameshita, I.
  • 雑誌名: Metabolism 巻: 60 ページ: 145-153
• [雑誌論文] CoPK32 is a novel stress-responsive protein kinase in the mushroom Coprinopsis cinerea (2011)
  • 著者名/発表者名: Kaneko, K., Sugiyama, Y., Yamada, Y., Sueyoshi, N., Watanabe, A., Asada, Y., Ishida, A., Kameshita, I.
  • 雑誌名: Biochim. Biophys. Acta 巻: 1810 ページ: 620-629
• [雑誌論文] Influence of Ser/ Pro-rich domain and kinase domain of doublecortin-like protein kinase on microtubule-binding activity (2011)
  • 著者名/発表者名: Nagamine, T., Shimomura, S., Sueyoshi, N., Kameshita, I.
  • 雑誌名: J. Biochem 巻: 149 ページ: 619-627
• [雑誌論文] Application of multi-PK antibody that detects a wide variety of protein kinases (2011)
  • 著者名/発表者名: 亀下勇、末吉紀行
  • 雑誌名: 生化学 巻: 83 ページ: 330-335
  • NAID: 10029068281
  • 査読あり
• [雑誌論文] CoPK32 is a novel stress-responsive protein kinase in the mushroom Coprinopsis cinerea (2011)
  • 著者名/発表者名: 金子啓祐, 他
  • 雑誌名: Biochimica Biophysica Acta 巻: 1810 ページ: 620-629
  • 査読あり
• [雑誌論文] Influence of Ser/Pro-rich domain and kinase domain of doublecortin-like protein kinase on microtubule-binding activity (2011)
  • 著者名/発表者名: 永峰賢, 他
  • 雑誌名: The Journal of Biochemistry 巻: 149 ページ: 619-627
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of protein kinase substrates in tissue extracts after separation by isoelectric focusing (2011)
  • 著者名/発表者名: 千賀由佳子, 他
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: 408 ページ: 345-347
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase IV involvement in the pathophysiology of glucotoxicity in rat pancreatic β-cells (2011)
  • 著者名/発表者名: 杉山康憲, 他
  • 雑誌名: Metabolism 巻: 60 ページ: 145-153
  • 査読あり
• [雑誌論文] The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/ epsilon (2010)
  • 著者名/発表者名: Sugiyama, Y., Hatano, N., Sueyoshi, N., Suetake, I., Tajima, S., Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Koike, T., Kameshita, I.
  • 雑誌名: Biochem. J 巻: 427 ページ: 489-497
• [雑誌論文] A minimum size homologue of Ca^<2+>/ calmodulin-dependent protein kinase IV naturally occurring in zebrafish (2010)
  • 著者名/発表者名: Nimura, T., Sugiyama, Y., Sueyoshi, N., Shigeri, Y., Ishida, A., Kameshita, I.
  • 雑誌名: J. Biochem 巻: 147 ページ: 857-865
  • NAID: 10027876530
• [雑誌論文] Expression and characterization of PKL01, an Ndr kinase homologue in Lotus japonicus (2010)
  • 著者名/発表者名: Kameshita, I., Shimomura, S., Nishio, K., Sueyoshi, N., Nishida, T., Nomura, M., Tajima, S.
  • 雑誌名: J. Biochem 巻: 147 ページ: 799-807
• [雑誌論文] Identification of an endogenous substrate of zebrafish doublecortin-like protein kinase using a highly active truncation mutant (2010)
  • 著者名/発表者名: Shimomura, S., Nagamine, T., Hatano, N., Sueyoshi, N., Kameshita, I.
  • 雑誌名: J. Biochem 巻: 147 ページ: 711-722
  • NAID: 10027875877
• [雑誌論文] Oxazolone-induced over-expression of focal adhesion kinase in colonic epitherial cells of colitis mouse model (2010)
  • 著者名/発表者名: Ma, Y., Semba, S., Takeuchi, M., Kameshita, I., Ishida, A., Kato, S., Katoh, T., Liu, Y., Taniguchi, T.
  • 雑誌名: FEBS Lett 巻: 584 ページ: 3949-3954
• [雑誌論文] Oxazolone-induced over-expression of focal adhesion kinase in colonic epithelial cells of colitis mouse model (2010)
  • 著者名/発表者名: Ma Yanju, 他
  • 雑誌名: FEBS Letters 巻: 584 ページ: 3949-3954
  • 査読あり
• [雑誌論文] A minimum size homologue of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase IV naturally occurring in zebrafish (2010)
  • 著者名/発表者名: 二村貴樹, 他
  • 雑誌名: The Journal of Biochemistry 巻: 147 ページ: 857-865
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression and characterization of PKL01, an Ndr kinase homolog in Lotus japonicus (2010)
  • 著者名/発表者名: 亀下勇, 他
  • 雑誌名: The Journal of Biochemistry 巻: 147 ページ: 799-807
  • NAID: 10027876295
  • 査読あり
• [雑誌論文] DNA-binding activity of mouse Dnmt1 is regulated by CK1 (2010)
  • 著者名/発表者名: 杉山康憲, 他
  • 雑誌名: Biochemical Journal 427 ページ: 489-497
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of an endogenous substrate of zebrafish doublecortin-like protein kinase using highly active truncation mutant (2010)
  • 著者名/発表者名: 下村幸子, 他
  • 雑誌名: The Journal of Biochemistry 147 ページ: 711-722
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel Ca^<2+>/ calmodulin-dependent protein kinase expressed in actively growing mycelia of the basidiomycetous mushroom Coprinus cinereus (2009)
  • 著者名/発表者名: Kaneko, K., Yamada, Y., Sueyoshi, N., Watanabe, A., Asada, Y., Kameshita, I.
  • 雑誌名: Biochim. Biophys. Acta 巻: 1790 ページ: 71-79
• [学会発表] DCLK2の微小管結合とキナーゼ領域の核移行 (2011)
  • 著者名/発表者名: 永峰賢
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2011-12-14
• [学会発表] CaMキナーゼIδ-LLの生化学的諸性質の解析と遺伝子ノックダウン (2011)
  • 著者名/発表者名: 千賀由佳子
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2011-12-14
• [学会発表] Ca^<2+>/ CaM依存性プロテインキナーゼIδ-LL(CaMKIδ-LL)の生化学的諸性質の解析と遺伝子ノックダウン (2011)
  • 著者名/発表者名: 千賀由佳子、吉岡慶子、末吉紀行、亀下勇
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] Doublecortin-like protein kinase 2の微小管結合とキナーゼ領域の核移行 (2011)
  • 著者名/発表者名: 永峰賢、末吉紀行、亀下勇
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] マウス脳においてタンパク質レベルと細胞内局在が日内変動するプロテインキナーゼの探索 (2011)
  • 著者名/発表者名: 杉山康憲、広瀬健太郎、吉種光、亀下勇、深田吉孝
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] マウス全脳の様々な細胞内画分において発現量が日内変動するプロテインキナーゼの探索 (2011)
  • 著者名/発表者名: 杉山康憲、広瀬健太郎、吉種光、亀下勇、深田吉孝
  • 学会等名: 第18回日本時間生物学会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-11-24
• [学会発表] 担子菌キノコにおける新規ストレス応答性プロテインキナーゼの機能解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 金子啓祐、杉山康憲、山田祐介、末吉紀行、渡邊彰、麻田恭彦、石田敦彦、亀下勇
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2011-09-22
• [学会発表] ゼブラフィッシュで探るCaMKPとCaMKP-Nの機能と活性調節機構 (2011)
  • 著者名/発表者名: 末吉紀行
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2011-09-22
• [学会発表] 植物NdrキナーゼのTyrリン酸化活性 (2011)
  • 著者名/発表者名: 片山将一、杉山康憲、末吉紀行、寺地徹、亀下勇
  • 学会等名: 平成23年度日本農芸化学会西日本支部・中四国支部合同大会
  • 発表場所: 宮崎
  • 年月日: 2011-09-16
• [学会発表] Ca^<2+>/ CaM依存性プロテインキナーゼI(CaMKI)-deltaはゼブラフィッシュの正常な胚発生に重要である (2010)
  • 著者名/発表者名: 千賀由佳子、永峰賢、二村貴樹、末吉紀行、亀下勇
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会第83回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2010-12-10
• [学会発表] 植物Ndrキナーゼの自己チロシンリン酸化活性 (2010)
  • 著者名/発表者名: 片山将一、杉山康憲、末吉紀行、寺地徹、亀下勇
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会第83回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2010-12-10
• [学会発表] マウス脳におけるプロテインキナーゼの発現と細胞内局在の日内変動 (2010)
  • 著者名/発表者名: 杉山康憲、広瀬健太郎、吉種光、亀下勇、深田吉孝
  • 学会等名: 第83回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2010-12-10
• [学会発表] Detection of protein kinases and phosphatases expressed in mushroom (2010)
  • 著者名/発表者名: 亀下勇
  • 学会等名: The Biology of Fungi-IMC9
  • 発表場所: エジンバラ(英国)
  • 年月日: 2010-08-04
• [学会発表] ゼブラフィッシュの初期胚発生におけるCa^<2+>/ CaM依存性プロテインキナーゼI delta(CaMKIdelta)の役割 (2010)
  • 著者名/発表者名: 千賀由佳子、永峰賢、二村貴樹、末吉紀行、亀下勇
  • 学会等名: 第51回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 山口
  • 年月日: 2010-05-14
• [学会発表] ゼブラフィッシュDoublecortin-like protein kinase(zDCLK)の活性型変異体を用いた内在性基質の探索ならびに同定 (2009)
  • 著者名/発表者名: 下村幸子、永峰賢、波多野直哉、末吉紀行、亀下勇
  • 学会等名: 第32回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2009-12-09
• [学会発表] CaMKIdはゼブラフィッシュの正常な胚発生に不可欠である (2009)
  • 著者名/発表者名: 千賀由佳子、永峰賢、二村貴樹、末吉紀行、亀下勇
  • 学会等名: 第32回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2009-12-09
• [学会発表] Doublecortin-line protein kinaseとDoublecortinの微小管結合力の違いはSP領域に起因する (2009)
  • 著者名/発表者名: 永峰賢、下村幸子、末吉紀行、亀下勇
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2009-10-22
• [学会発表] マウスDNAメチルトランスフェラーゼ1のDNA結合活性はカゼインキナーゼ1によるリン酸化によって制御される (2009)
  • 著者名/発表者名: 杉山康憲、関口茉里、末吉紀行、波多野直哉、木下英司、木下恵美子、小池透、末武勲、田嶋正二、亀下勇
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2009-10-22
• [学会発表] マウス Dnmt1のDNA結合性はCK1によるリン酸化によって制御される (2009)
  • 著者名/発表者名: 杉山康憲
  • 学会等名: 第82回 日本生化学会
  • 発表場所: 神戸国際会議場(兵庫県)
  • 年月日: 2009-10-22
• [学会発表] 担子菌キノコに発現する浸透圧応答性プロテインキナーゼの解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 金子啓祐、杉山康憲、末吉紀行、亀下勇
  • 学会等名: 第50回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 鳥取
  • 年月日: 2009-05-16
• [備考]
  • URL: http://www.ag.kagawa-u.ac.jp/sueyoshi/index.html
• [備考]
  • URL: http://www.ag.kagawa-u.ac.jp/sueyoshi/index.html
• [備考]
  • URL: http://www.ag.kagawa-u.ac.jp/sueyoshi/index.html
• [備考]
  • URL: http://www.ag.kagawa-u.ac.jp/sueyoshi/index.html
• [産業財産権] 抗チロシンキナーゼ抗体及びその利用 (2012)
  • 発明者名: 杉山康憲、末吉紀行、亀下勇、茂里康、達吉郎、湯元昇、石田敦彦、谷口隆信
  • 権利者名: 香川大学、産業技術総合研究所
  • 取得年月日: 2012-03-30
• [産業財産権] セリン-トレオニンタンパク質リン酸化酵素を認識するモノクローナル抗体 (2009)
  • 発明者名: 茂里康、達吉郎、湯元昇、石田敦彦、柘植敏之、岡崎勝一郎、亀下勇
  • 権利者名: 香川大学、産業技術総合研究所
  • 取得年月日: 2009-07-17